医院护理人员结核潜伏感染的调查研究

摘要:目的应用酶联免疫斑点试验(ELISPOT，即T-SPOT．TB)检测并了解医院护理人员结核分枝杆菌潜伏感染情况。方法收集我院182名护理人员(其中内科病区75人，外科病区78人，辅助科室29人)的外周血进行T-SPOT．TB试验，分析结核潜伏感染情况。结果182名护理人员中，T-SPOT．TB阳性者47人，总潜伏感染率25.82%;内科、外科及辅助科室的T-SPOT．TB阳性率分别为22．67%(17/75)、26．92%(21/78)、31．03%(9/29)，差异无统计学意义(χ2=0．85，P=0．65)。工作年限≥3年的护士T-SPOT．TB的阳性率31.9%(37/116)，明显高于工作年限＜3年的护士T-SPOT．TB阳性率15．2%(10/66)，差异有统计学意义(χ2=6．16，P=0．01)，其RR值为2．62(95%CI:1．21～5．71)。结论综合性医院的护理人员结核潜伏感染率可受工作年限的影响，且与工作年限呈正相关，而受所在科室类别的影响较小。

关键词:结核分枝杆菌;潜伏感染;酶联免疫斑点试验;护理人员

结核潜伏感染(Latenttuberculosisinfection，LTBI)是宿主感染结核分枝杆菌后尚未发病的一种特殊状态，机体不表现出临床症状但又不能将其彻底清除，但结核菌素皮肤试验(Tuberculinskintest，TST)或γ-干扰素释放试验(Interferon-gammareleaseassays，IGRAs)可表现为阳性。在机体免疫力低下时，LTBI可发展成为活动性肺结核病或其他脏器的结核［1］。因此，了解结核潜伏感染的状况并适当地给予干预治疗对减少全球结核有着重要的意义。IGRAs是目前应用较广泛的一种快速敏感的检测LTBI的方法，其通过检测结核分枝杆菌特异性靶抗原刺激体内效应T细胞释放的γ-干扰素来判断有无结核感染。目前商品化的试剂盒主要有QFT-GIT和T-SPOT.TB两种［2］。笔者采用T-SPOT.TB技术检测我院护理人员结核特异抗原刺激体内效应T细胞数，从而对医护人员的LTBI现状进行调查，以发现高危人群，旨在为医护人员结核的预防与控制奠定基础。

1对象与方法

1.1对象

选择在我院各科室工作1年以上的护士共182人，其中，内科病区75人，外科病区78人，辅助科室29人。内科病区护士包括呼吸内科24人、消化内科19人、心内科17人、神经内科8人、肾脏内科6人和内分泌科1人;外科病区护士包括骨科27人、心胸外科18人、普外科18人、神经外科9人和泌尿外科6人;辅助科室护士包括检验科10人、影像科10人、超声科5人和药剂科4人。所有检测对象均为女性，年龄26～43岁，平均年龄(34.54±4.21)岁。工作年限≥3年的116人，＜3年的66人。身体健康，临床表现及影像学无活动性结核的特征，同时无使用免疫抑制剂或增强剂及妊娠女性。

1.2方法

1.2.1主要仪器和试剂ESCO二级生物安全柜，37℃，5%CO2培养箱，T-SPOT.TB(OxfordImmunotec，Abingdon，UK)检测试剂盒由上海复兴长征公司提供。1.2.2外周血T-SPOT.TB试验(1)使用含肝素抗凝剂的真空采血管采集足量的(4～6mL)外周静脉血，混匀，需在4h内进行外周血单个核细胞(PBMC)的分离。将抗凝全血按1∶1等比例与1640培养液混合，按(2～3)∶1比例将稀释血样缓慢加到Ficoll淋巴细胞分离液上，18℃，1000r/min离心22min，分离PBMC。离心洗涤并计数，最终调整细胞量至2.5×106/mL。(2)将T-SPOT.TB培养板从铝封袋中取出，平衡至室温，做好标记。在每个样本的板条上分别加入50μL阴性对照AIM-V，50μL抗原A，50μL抗原B和50μL阳性对照［植物血凝素(Phytohaemaggluti-nin，PHA)］。然后在四个孔中分别加入100μL细胞悬液，置于37℃，5%CO2培养箱中孵育16～20h。依次加入酶标二抗和底物显色液后形成斑点，在全自动ELISPOT读数仪上(AID-ispot，Strassberg，Germany)读取斑点数。(3)结果判读:当阴性对照孔斑点数＜6时，任意一抗原孔的斑点数减去对照孔斑点数≥6;或者当阴性对照孔斑点数≥6时，任意一抗原孔的斑点数大于阴性对照孔的两倍，可判断为T-SPOT.TB结果阳性。而当阴性对照孔斑点数＞10或阳性对照孔斑点数＜20时，则认为T-SPOT.TB结果不确定，此时需要复查。

1.3统计学方法

采用SPSS19.0进行数据统计分析。采用χ2检验或Fisher确切概率法进行计数资料的比较，采用非参数的秩和检验进行计量资料的比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1外周血

T-SPOT.TB检测结果182名护理人员中，T-SPOT.TB检测阳性者47人，总潜伏感染率为25.82%。其中仅抗原ESAT-6为阳性的有15人，仅抗原CFP10为阳性的有8人，抗原ESAT-6和CFP10同时为阳性的有24人。

2.2不同科室护理人员

T-SPOT.TB检测结果比较比较不同科室护理人员的结核潜伏感染情况。内科、外科及辅助科室护理人员的T-SPOT.TB阳性率分别为22.67%(17/75)、26.92%(21/78)、31.03%(9/29)，差异无统计学意义(χ2=0.85，P=0.65)。在内科组护士中，呼吸科、消化内科的T-SPOT.TB阳性率分别为37.50%(9/24)和26.32%(5/19)，差异无统计学意义(χ2=0.60，P=0.43)。神经内科和肾脏内科的T-SPOT.TB阳性率分别为12.50%(1/8)和16.67%(1/6)，差异同样无统计学意义(χ2=0.05，P=0.83)。而17例心内科护士的T-SPOT.TB结果均为阴性，1例内分泌科护士的T-SPOT.TB结果为阳性。在外科组护士中，心胸外科护士T-SPOT.TB的阳性率最高，为38.89%(7/18)，其次为骨科，与心胸外科相比，差异无统计学意义(χ2=0.15，P=0.70)。普外科和泌尿外科的T-SPOT.TB阳性率分别为22.22%(4/18)和16.67%(1/6)，均低于心胸外科，但差异同样无统计学意义(χ2=1.18，P=0.47;χ2=1.00，P=0.62)，而9例神经外科护士的T-SPOT.TB结果均为阴性。在辅助科室的护士中，检验科和影像科的T-SPOT.TB阳性率均为30.00%(3/10)，与超声科和药剂科的T-SPOT.TB阳性率相比，差异均无统计学意义(χ2=0.15，P=0.70;χ2=0.04，P=0.85)。

2.3不同工作年限护理人员

T-SPOT.TB检测结果比较本研究中工作年限≥3年的护士有116例，T-SPOT.TB的阳性率为31.9%，明显高于工作年限＜3年的护士T-SPOT.TB阳性率15.2%(P=0.01)。而在不同科室中，工作年限≥3年的护士T-SPOT.TB阳性率均高于工作年限＜3年的护士，但差异无统计学意义(P＞0.05)，其RR值为2.62(95%CI:1.21-5.71)。3讨论结核病仍然是一项严重的全球性公共卫生问题。近年来，由于流动人口增加、多种耐药菌的增多及HIV/AIDS的流行等因素，全球结核病形势更加严峻。据WHO最新报告［3］，2014年，大约有960万新发结核病例(其中120万患者为艾滋病合并结核)，同时150万人群死于该病。而我国的新发结核人数为93万，位居全球第三位。因此，结核病的防控刻不容缓。而除了那些有明显症状的活动性结核患者外，对结核潜伏感染人群的诊断和预防治疗同样重要。目前，LTBI的诊断基于既往病史、TST或者IGRAs的检测结果、胸部放射学检测、体格检查、所处的环境和痰液检测等。医院被认为是极易造成结核潜伏感染的重要场所，而护理人员则是与患者接触最多的高危人群，有研究者采用结核菌素皮肤试验对结核病区护士的结核潜伏感染情况进行了分析，得出结核病区护士阳性率为97.5%，内外科病区护士阳性率分别为57.5%和44.4%［4］。而在本研究中，我们采用T细胞斑点试验来检测我院护理人员的结核潜伏感染状况，得出内外科病区的阳性率分别为22.67%和26.92%。T-SPOT.TB是以特异性抗原ESAT-6和CFP10为刺激原，用酶联免疫斑点技术判断有无结核感染的一种方法。该方法的两种抗原被证实在所有的卡介苗菌株及大多数非结核分枝杆菌中均不存在，保证了检测结果较高的特异性［2］。与传统的TST基本原理相同，但是该方法的优势在于检测周期短，能够在24h内获得结果;具有阳性对照和阴性对照;可发现免疫功能异常的患者，以保证结果的准确判读，并给临床医生提供有效的信息;不受接种卡介苗的影响［5］。在本研究中，我们对不同科室以及不同工作年限的护理人员的结核潜伏感染状况进行了比较分析。不同科室护理人员的T-SPOT.TB阳性率可比性不高，差异均无统计学意义(P＞0．05)，可能与部分科室受检样本量较少有关。但总体来说，内科组以呼吸内科和消化内科的T-SPOT.TB阳性率较高，心脏内科无阳性结果。外科组除神经外科无阳性结果外，心胸外科和骨科T-SPOT.TB阳性率相对较高。在不同科室内，工作年限≥3年的护理人员T-SPOT.TB阳性率均高于工作年限＜3年的护理人员，而差异无统计学意义。但是在不分科室的情况下，工作年限≥3年的护理人员T-SPOT.TB阳性率明显高于工作年限＜3年的护理人员，差异具有统计学意义(P＜0.05)。且工作年限≥3年的护理人员感染结核分枝杆菌的相对危险度是工作年限＜3年的护理人员的2.62倍。这与文献报道［6］一致。由此可见，综合性医院的护理人员结核潜伏感染率易受工作年限的影响，且与工作年限成正相关，而受所在科室类别的影响较小。因此，即使在综合性医院这种结核非密切接触的医疗机构，加强护理人员的结核防护仍然非常重要，尤其是那些工作时间较长的护理人员。

参考文献

［1］王芳芳，李金凤，林存智，等．结核分枝杆菌感染人群诊断及预防治疗研究进展［J］．中华临床医师杂志:电子版，2014(23):4257-4260．

［2］PaiM，DenkingerCM，KikSV，etal．GammainterferonreleaseassaysfordetectionofMycobacteriumtuberculosisinfection［J］．ClinMicrobiolRev，2014，27(1):3-20．

［3］WorldHealthOrganization．Globaltuberculosisreport2015［R］．2015．

［4］黄冬枚，席明霞，莫文娟，等．结核病区护士结核菌素皮肤试验结果分析［J］．护理研究，2012，36(2):144-145．

［5］FerraraG，LosiM，D＇AmicoR，etal．UseinroutineclinicalpracticeoftwocommercialbloodtestsfordiagnosisofinfectionwithMyco-bacteriumtuberculosis:Aprospectivestudy［J］．Lancet，2006，367(9519):1328-1334．

［6］张忠顺，楼海，肖和平．结核病专业人员及密切接触者结核潜伏感染的研究［J］．中国防痨杂志，2011，33(1):36-40.

作者:吴海玲 张鹏亮 单位:第四军医大学西京医院检验科