病菌集中营精选(九篇)
第1篇：病菌集中营范文
关键词：炭疽;标本采集;检验质量
【中图分类号】R751【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2012)03-0426-01
2011年4月果洛州玛沁县昌马河乡牧民班保帮助邻居剥食病死牛肉后，手臂出现水泡后逐渐变为紫红色，手臂肿胀明显。发病后患者没有在乡级卫生院治疗，直接到县医院就诊，县医院将患者情况上报县疾控中心，县疾控中心及时采样送州疾控中心进行检测。检测结果为检出炭疽芽孢杆菌。
1 材料和方法
接到县疾控送检的标本后，我中心立即进行检测。将送检的牛肉和渗出液直接用载玻片压片，革兰氏染色后镜检，镜下可见革兰氏阳性大杆菌。在镜检的同时将牛肉切碎和采集渗出液的棉签分别接种到两支营养肉汤管内37℃，6小时后，见接种棉签的肉汤清亮，有絮状物，接种牛肉的肉汤浑浊。将肉汤的接种物转普通营养琼脂平板和血平板，37℃，18小时后见营养琼脂平板上形成灰白色、不透明、无光泽、边缘不整齐，大而扁平的菌落。在低倍显微镜下可见菌落呈卷发状。在血平板上形成灰绿色、不透明、无光泽、边缘不整齐，大而扁平的菌落，无溶血环。挑起平板上的单个菌落做生化实验，生化检测结果为分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖不分解乳糖。在半固体上呈毛刷状生长。触酶实验阳性。将菌落涂布于营养琼脂平板上，贴上青霉素药敏片，37℃，18小时后观察结果为青霉素敏感，在涂布菌落的营养琼脂平板上滴加噬菌体后倾斜平板，让噬菌体流动，37℃，18小时后观察噬菌体流过的部位有明显的噬菌斑，结果为噬菌体裂解实验阳性。
2 结果
两份标本中均检出炭疽芽孢杆菌。
3 讨论
我中心是果洛州唯一一家长期开展炭疽芽孢杆菌检测的单位，近几年六县送检的环境标本及患者标本较多，但检出率很低，检出率低的主要原因是采取的标本不合格，部分接诊医生未及时上报，造成患者标本采集时大多已用药治疗几天，所以检不到阳性菌。检出率的高低与送检标本的质量和送检及时性关系密切[3]。果洛州皮肤炭疽病人较常见，主要原因是当地牧民对病死牲畜的尸体处理不当，有病死牲畜时不报告当地有关部门，而是宰杀病死牲畜进行分食。造成部分接触者患病，牧民对炭疽病的认识不足，急需加强宣传教育，使当地牧民掌握病死牲畜尸体的处理方法，有效管理疫情发生地，减少传染病的发生。
参考文献
［1］ 张眉眉，姚文清，田疆，于伟，毛玲玲.一起突发炭疽疫情中炭疽芽孢杆菌的分离及鉴定.中国卫生检验杂志，2008年18卷05期
第2篇：病菌集中营范文
【关键词】 机械通气； 肺炎； 病原学； 重症监护室
Analysis of treatment on 56 cases of ventilator-associated pneumonia in ICU MA Lin-jian, FU Qiang-heng,WU Xian-chuan,WANG Yuan-qiao.The Second Hospital of Dazhou, Si chuan 635000, China
【Abstract】 Objective to investigate the pathogen spectrum distribution and antimicrobial resistance in ventilator-associated pneumonia(VAP).Methods 56 cases of VAP were analysed retrospectively.Results 82 pathogen strains were isolated by bacterial culture,in which Gram-negative bacteria accounted for 67.07%(55strains),Gram-positive bacteria 20.73%,and fungi 12.20%(10strains).p.aeruginose(28strains),p.Klebsiella(13strains),moniliasis(10 strains)and S. aureus (8 strains ) were the four common kinds of pathogens. All of them showed drug-resistance to antibiotics.Conclusion Gram-negative bacteria are the most common pathogens of pneumonia isolated from patients with mechanical ventilation in ICU. Sensitive antibiotics should be selected based on the drug sensitive tests to improve the curative rate for VAP.
【Key words】 Mechanical ventilation; Pneumonia; Pathogens; ICU
机械通气是治疗呼吸衰竭的重要手段，但容易发生呼吸机相关性肺炎（VAP）。VAP是机械通气中的常见并发症，是医院内获得性肺炎病死的重要原因之一，随着机械通气技术在呼吸衰竭抢救治疗中的应用增多，VAP已经引起有关人员的高度重视,特别是在ICU内。了解VAP病原菌分布及耐药监测情况，对防治VAP有重要指导意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择2005年1月~2010年11月住笔者所在医院ICU的机械通气403例患者发生VAP 56例，其中，男32例，女24例，年龄14~77岁，平均（58±5）岁。呼吸机通气时间>72 h，同时进行心电、血压、血氧饱和度持续监测。基础原发病：慢性阻塞性肺疾病16例，脑血管意外10例，重度格林-巴利综合征1例，重症胸外伤8例，胸腹联合伤4例，脑外伤12例，药物中毒5例。
1.2 诊断标准 VAP临床诊断，机械通气48 h以上或撤机拔管48 h，具备以下2项或2项以上表现者入选本研究［1］；(1)发热，体温>38 ℃或较基础体温升高1 ℃。(2)外周血常规WBC>10.0×109/L或
1.3 标本采集 56例采用无菌吸痰管从气管插管采集下呼吸道分泌物进行病原菌培养。气管插管或者气管切开立刻取样培养2次；使用呼吸机>72 h后取样培养2次。取样时将样本置灭菌容器内，立即送细菌室作细菌培养，连续2次培养出同一优势菌株被确定为致病菌。
1.4 细菌鉴定及药敏试验 采用VITEK-AMS全自动微生物鉴定系统（法国梅里埃公司制造）进行鉴定及药敏试验。质控标准菌株为大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌（ATCC27853）。
2 结果
2.1 菌株分布 56例患者第1次培养出菌株49株，其中草绿色链球菌15株，燥奈瑟氏菌13株，肺炎克雷伯杆菌9株，类白喉菌7株，微球菌3株。卡他球菌2株，其中致病菌2株。第2次培养出菌株82株，其中铜绿假单胞菌28株，嗜麦芽假单胞菌6株，恶息假单胞菌5株，鲍曼复合不动杆菌4株，肺炎克雷伯杆11株，阴沟肠杆菌1株，金黄色葡萄球菌8株，表皮葡萄球菌4株，粪肠球菌3株，链球菌2株，10株真菌为白色念球菌。同时存在2种或2种以上细菌的有15例，占26.79%，革兰阴性细菌（G-）占67.07%（55株），革兰阳性细菌（G+）占20.73%(17株)，真菌占12.20%(10株)。
2.2 病原体对常用抗菌药物的耐药情况 10株白色念珠菌对5-氟胞嘧啶、制霉菌素敏感，而对咪康唑、酮康唑耐药。革兰阳性菌及革兰阴性菌对常用抗菌药物耐药情况见表1和表2。从表1看，万古霉素对四种G+菌均敏感。从表2看，亚安培南的耐药率最低。
3 讨论
VAP是一种机械通气患者发生的院内感染性疾病，是指原无肺部感染的呼吸衰竭患者，在机械通气过程中所获得的感染。VAP是ICU患者院内获得性感染的主要病因之一，是影响机械通气患者病死率的独立因素。在ICU病房，VAP发生率达9％～27％，病死率高达20％～50％。在抗生素治疗不当的病例及多重耐菌感染病例的病死率可达70％［2］。本组56例的病死率高达51.8%（29/56）。
3.1 VAP的诱发因素
3.1.1 年龄及基础疾病所致全身免疫力下降 本组56例VAP患者中，47例年龄>60岁，年老体弱的机械通气患者，因其机体抵抗力较低，较其他人群更容易发生肺部感染。本组病例大多患有COPD、肺部感染、胸部外伤、多脏器功能不全等严重疾病，基础疾病的严重程度本身是引起VAP的重要发病因素。
3.1.2 呼吸道防御功能减弱 气管插管和气管切开直接破坏了人体正常的呼吸道防御功能，使外界直接与下呼吸道相通，鼻腔和口腔的生理防御功能消失。插管及吸痰时负压对气管黏膜的损伤，降低了局部抵抗力；正压通气抑制呼吸道纤毛正常运动，痰液排出受阻；机械通气过程中，人-机对抗，使用镇静剂，咳嗽反射和喷嚏反射受到抑制，气道对微生物强大防御性反射消失。机械通气时间越长，气道损伤越严重，感染率越高。
3.1.3 自身菌群的移位 口咽部、胃肠道定植菌是机械通气并发肺部感染的重要来源。气管插管或气管切开的患者，口咽部感觉迟钝，咳嗽反射减弱或消失，无力吞咽口咽分泌物及反流至口腔的胃肠液而导致液体吸入气管；口咽部的细菌沿气管插管的管壁直接向下蔓延至支气管-肺部；胃管的留置使食管相对关闭不全，胃内容物易反流至口咽部经气管误吸入肺。气管导管刺激上呼吸道产生的分泌物有利于细菌生长，仰卧位增加了患者细菌吸入和定值的危险。
3.1.4 消毒隔离制度不严格 ICU是一个特殊的环境，危重患者集中，基础疾病严重，空间相对狭小。医务人员如未能做到不同操作前后严格洗手或更换手套，可使病原菌在手-环境-物品之间循环污染而致交叉感染。
3.1.5 无菌操作不严，吸痰操作不规范 吸痰除因操作者将细菌经手和吸痰管带入下呼吸道外，还因操作不当使气管黏膜损伤而使致病菌侵入。侵入性操作是发生院内感染的另一种主要因素，病原菌耐药率高常常是混合感染。
3.1.6 药物因素 长期使用广谱抗生素及糖皮质激素，易诱导菌株耐药，菌群移位及真菌感染。
3.1.7 呼吸机使用时间过长 有报道，机械通气数小时后呼吸机管道系统就被污染［3］。本组56例中只有2例发生在使用呼吸机后的3 d内，约占3.57％，发生在5 d内者9例，约占16.07％，发生在7 d以上者45例，占约80.36％。
3.2 VAP的防治
3.2.1 严格执行消毒隔离制度，保持手卫生 对医护人员进行VAP相关知识的培训，对于预防院内感染是很重要的。医务人员要接触患者而且进行大量的操作，一些导致VAP的病原微生物就是通过ICU医护人员的手污染或器械污染而传播的。医护人员在接触患者前后，应按六步洗手法规范洗手，是预防VAP的重要措施。病房内加强空气消毒，有条件的可行层流净化消毒；呼吸机管道、湿化罐应每周更换、消毒，冷凝水应及时倾倒、严禁倒在地上；对特殊感染的患者，如MRSA患者，应严格隔离并做好各种防护措施。
3.2.2 加强患者口腔护理与半卧位 机械通气的患者大部分时间处于平卧位，而平卧位可能增加胃肠分泌物逆流和口咽部分泌物误吸的机会。半卧位利用的抗逆流作用，能减少胃肠内容物的反流，可最大限度减少菌群移位。(1)在病情允许情况下尽量将床头抬高30°~45°，以减少胃内容物返流。(2)加强口腔护理，通过对患者牙齿、口腔的清洁可明显减少口咽部细菌定植，对吸入性肺炎有预防作用。(3)选择小口径胃管，确保胃管插入胃内，用微量泵持续输注肠内营养液，防止胃内压增高，经常检查是否有胃内潴留，注意有无腹胀及肠鸣音情况，必要时调整营养液的输注速度和量。（4）使用胃动力药物。（5）气管插管或气管切开者气囊内压宜保持在25~30 cm H2O。
3.2.3 加强排痰引流 机械通气的患者每1～2 h翻身拍背1次，也可用自动排痰机。吸痰前给予100％氧气过度通气，吸氧3 min。每次吸痰时间＜15 s。掌握正确的吸痰技术，成人吸痰压力
3.2.4 加强呼吸机管道和相关物品的管理 呼吸机通气回路中的冷凝水内有细菌定植，集水杯应放在呼吸回路的最低位置，避免倒流入肺，应及时倾去集水杯内的冷凝水。呼吸回路是细菌寄居的重要部位，细菌来自患者的呼吸道。使用一次性呼吸回路，每周更换一次；呼吸回路内有血、分泌物等污染时应立即更换，从而减少VAP的发生。
3.2.5 缩短机械通气时间 根据“感染控制窗”，按照有创-无创序贯通气策略，尽早脱机拔管，从而减少VAP的发生。在整个机械通气过程中，VAP危险性平均每天增加1％～3％［5］。
3.2.6 增强机体免疫力 凡使用机械通气的患者，应给予足够的营养支持，可选用胃肠外营养和肠内营养同时进行或单纯的胃肠内营养，以提高机体抵抗力。鼻饲供给营养者，应行清流质饮食，少量多餐，加强营养支持。给予细胞免疫和体液免疫治疗，增强机体免疫防御功能。强化胰岛素治疗，严格控制血糖在6~10 mmol/L。危重患者血糖升高，将加重感染，使感染难以控制。严格控制血糖水平被认为是控制感染的一部分，有研究表明，控制血糖于正常水平可使并发血源性感染的概率降低46％［6］。
3.2.7 抗生素的合理应用 长期行机械通气的患者，每周常规作口咽部及下呼吸道痰液细菌培养，根据药敏结果选用针对性强的抗生素。一旦怀疑VAP者均立即更换抗菌素，并立即行痰培养及药敏检查。本组56例第1次培养阳性39例，占69.64％，第2次培养阳性14例，占25％，二次培养阳性率94.64％。本组中培养菌革兰阴性杆菌以绿脓杆菌，大肠杆菌及肺炎克雷伯杆菌为主，阳性球菌以金黄色葡萄球菌为主。药敏试验敏感抗菌素依次为万古霉素、泰能，头孢三嗪、头孢哌酮钠/舒巴坦钠，头孢他啶，丁胺卡那霉素。一旦疑诊，在没有痰培养结果前均在先行使用头孢哌酮钠/舒巴坦钠的基础上根据肾功能情况决定是否加用丁胺卡那霉素。有培养及药敏结果后根据情况使用敏感抗菌素，药敏耐药性最低的抗菌素泰能、万古霉素作为为最终选择，一般在其它抗菌素疗效差或起效慢而病情较重时使用。由于革兰阴性菌比如铜绿假单胞菌、广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌以及革兰阳性细菌如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌更具有多重耐药性，所以早期应用广谱抗生素适合怀疑VAP的多数患者的治疗［7］。多数VAP患者接受正确的抗生素治疗1周是安全、有效的［8］。VAP发病率高，病死率高，治疗困难，加强预防是关键。患者采取床头抬高30°~45°、加强口咽部护理、声门下密闭式吸痰、严格洗手、定期更换呼吸机管道等是重要的VAP预防措施，可减少机械通气患者VAP的发生率。根据痰培养及药敏试验选择敏感抗生素治疗VAP，可提高VAP的治愈率。
参考文献
［1］ 蔡少华，张进川，钱桂生.呼吸机相关肺炎的诊断研究进展.中国危重病急救医学，2000，12：566-569.
［2］ American Thoracic Society, Infectious Diseases Society of America. Guidelines for the management of adults with hospital acquired，ventilator associated, and healthcare associated pneumonia.Am J Respir Crit Care Med,2005,171(4):388-416.
［3］ 刘亚平，韩江娜，马遂.呼吸机管道系统更换与呼吸机相关性肺炎.中华结核和呼吸杂志，2001,24(8):508-509.
［4］ Mulders K, Van Der Heaven H,Weers Pothoff I, et al. A randomized clinical trial of intermittent subtleties secretion drainage in patients receiving mechanical ventilation.Chest，2002,121(3):858-862.
［5］ 蔡少华.呼吸机相关肺炎的预防新策策略.国外医学内科学分册，2000,27(6):242-245.
［6］ American Thoracic Society，Infectious Diseases Society of America. Guidelines for the management of adults with hospital acquired，ventilator associated，and healthcare associated pneumonia.Am J Respir Crit Care Med,2005,171(4):388-416.
［7］ Rello J，Vidaur L，Sandiumenge A，et al.De escalation therapy in ventilator associated pneumonia.Crit Care Med，2004,32(11):2183-2190.
［8］ VidaurL，Sirgo G，Rodriguez，et al. Clinical approach to the patient with suspected ventilator associated pneumonia.Respire Care，2005,50(7):965-974.
第3篇：病菌集中营范文
关键词：深凹杯伞（Wtshyp2011001）；采集分离；液体优化培养；特殊菌株；培养基配方 文献标识码：A
中图分类号：R378 文章编号：1009-2374（2017）06-0026-02 DOI：10.13535/ki.11-4406/n.2017.06.013
山西省菌类资源丰富，特别是五台山蘑菇种类很多，是一种营养极高的食用菌类作物。主要品种有台蘑小香蕈、银盘蘑菇、鸡腿菇、虎皮香蕈、秋露白等特殊菌种，具有很高的研究价值和经济价值，每年7月至9月是蘑菇采集的最佳季节。台蘑的特点：肉质细嫩，色泽乳白，菌体肥大，油性大，香味浓，可烹制成多种荤素名肴，是席上珍馐，五台山南台附近是主产地，出产的品质也最佳。台蘑除了有很高的营养价值之外，还有很好的医疗功效，长期食用可延年益寿，而且能产生对病毒的抗体，增加对感冒等病毒性疾病的抵抗力；还能起降低胆固醇，防止动脉硬化、肾脏病、胆结石、糖尿病、肝硬化等作用。我们通过五台山特殊菌种采集、分离与鉴定，得到一种具有重要研究价值的特殊菌株深凹杯伞，代号：Wtshyp2011001。
1 特殊菌种的采集、分离、鉴定
2011年7月，我们在山西五台山进行了特殊蕈菌的采集、分离，海拔1600～2300米的落叶松的天然混交林中。
1.1 菌种采集、分离、纯化过程
1.2 特殊菌种的分离、鉴定
我们对五台山特殊真菌进行了采集、收集、分离，共分离出8种特殊菌株。其中对采集分离到的特殊菌株（Wtshyp2011001）进行了鉴定，结果如下：
菌株（Wtshyp2011001）ITS序列为95 ITS45，blast结果与Ampulloclitocybe clavipes（棒柄瓶杯伞）相似性为99%，与Infundibulicybe gibba（Clitocybe gibba，深凹杯伞）相似性为96%，但是下载另外几条的Ampulloclitocybe clavipes ITS序列，相似性最高只有88%（见下图），所以该菌株是否为Ampulloclitocybe clavipes还不能确定，需要其他的marker来确证。核糖体大亚基序列为95 LSU，blast结果与Infundibulicybe gibba相似性为99%，与Ampulloclitocybe clavipes相似性为93%。结合ITS和LSU的结果，基本认为该种为Infundibulicybe gibba（Clitocybe gibba，深凹杯伞）。
表1主要对蔗糖3.0%，2.0%，1.0%；葡萄糖3.0%，2.0%，1.0%；牛肉膏1.5%，1.0%，0.5%；蛋白胨1.0%，0.5%，0%；磷酸盐：KH2PO40.05%，K2HPO40.05%；KH2PO40%，K2HPO40.1%；KH2PO40.05%，K2HPO4 0%；NaNO3 0.1%，0.3%，0.5%进行了考察，其他组分不变。
2.2 考察结果
用菌丝生长浓度作为对比参数。
培养条件：温度22℃～24℃，时间8～10天，摇瓶装量：100mL/250mL瓶，摇瓶转速180r.p.m。
2.2.1 碳源、氮源考察结果：
从表2实验结果得出：选择葡萄糖3.0%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%作为碳源、氮源较合理，且经济，菌丝生长快，菌丝相对浓度平均为42.4%。
2.2.2 磷酸}、无机盐的考察结果：
从表2实验结果得出：选择NaNO30.3%作为无机盐、K2HPO40.1%较合理，菌丝生长速度快，菌丝相对浓度平均为46.1%。从表1至表2培养基初步考察试验结果，通过考察方差分析，确定了台蘑深凹杯伞（Wtshyp2011001）最佳培养基配方以及培养工艺条件。葡萄糖3.0%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，蚕蛹粉0.5%，NaNO3 0.3%，K2HPO4 0.1%，KCL 0.05%，FeSO4 0.001%，pH7.0。
2.3 深凹杯伞（Wtshyp2011001）液体培养温度考察
在对分离的台蘑深凹杯伞（Wtshyp2011001）进行培养基筛选的同时，对培养温度也进行了考察，分三个温度段：16℃～18℃、18℃～20℃、22℃～24℃，比较菌种生长浓度（见表3）。
表3温度考察试验得出：深凹杯伞（Wtshyp2011001）在培养温度22℃～24℃培养，菌丝长势最佳，菌丝浓度达到平均39.5%。
通过以上深凹杯伞（Wtshyp2011001）培养基配方考察试验及温度考察试验，我们得出：深凹杯伞（Wtshyp2011001）最佳培养基配方及培养条件：葡萄糖3.0%，牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，蚕蛹粉0.5%，NaNO3 0.3%，K2HPO4 0.1%，KCL0.05%，FeSO4 0.001%，pH7.0。
培养条件：温度22℃～24℃，时间8～10d，摇瓶装量：100mL/250mL瓶，摇瓶转速180r.p.m。
台蘑的生长与五台山特殊的地理区域、气候、植被以及牲畜活动密切相关。台蘑粗蛋白含量高达41.84%，组成台蘑蛋白质的氨基酸种类齐全，尤其是人类必需的8种氨基酸更为丰富。台蘑具有增强机体综合免疫水平、抗肿瘤、预防和辅助治疗心脑血管系统疾病以及调节内分泌、保肝护肝、镇静安神、润肺祛痰等扶正压邪的功效。
我们对采集分离的深凹杯伞（Wtshyp2011001）进行了液体优化培养，对其培养菌丝体进行了有效成分粗多糖的提取，为今后开展药效学研究奠定了良好的基础。
参考文献
[1] 王书光.五台山区台蘑资源培育开发前景探讨[J].山西林业，2015，（2）.
[2] 贺沛芳，等.五台山野生食用菌资源营养价值及展望[J].中国食用菌，2000，29（3）.
[3] 任宝生.台蘑的驯化栽培及其产业化开发[J].山西林业科技，2007，（4）.
[4] 史光中，等.五台山蘑菇（台蘑）资源及其营养价值[J].山西农业科技，1983，（6）.
[5] 王云，杨晋明，刘宏伟，孟丽君，黄静.五台山大型真菌资源调查[J].中国野生植物资源，2007，（5）.
第4篇：病菌集中营范文
关键词：光合细菌 大棚 富集培养 液体培养基 淡水养鱼
0 引言
光合细菌 简称psb 是一种在厌氧条件下进行非放氧型光能异氧的水圈微生物，在水中光照条件下可直接分解利用有机物、氨基酸和糖类，在自身增殖的同时起到净化水质，防治鱼病的作用。营养丰富，菌体含蛋白质60%以上，富含维生素，尤其是b族维生素，及生理活性物质（辅酶q）等物质，可用为一种饲料添加剂在水产养殖中广泛应用。
1 psb的培养
1.1 psb的原液引种
引进psb原液，然后在塑料大棚内建造水池，放入液体培养基，采用厌氧富集扩大培养的方法将原液扩繁成psb培养液。
1.2 培养基的配制
培养基配方：将1.0gnh4cl、0.5gk2hpo4、0.2gmgcl2、2.0gnacl、0.1g酵母膏溶于500ml的清水中，加入麦麸和玉米面过滤液400ml，另加10%nahco3溶液50ml及2ml无水乙醇，补水至1000ml(不用灭菌)，按此配方配制成液体培养基，用磷酸调ph值至7.0后将其置入水池中。
1.3 建塑料大棚和水池
塑料大棚可以按蔬菜大棚方式建造，也可以按临时可移动框架大棚建造。大棚位置东西走向，这样采光好，保温。大棚内有水源和电源。在大棚内建大小2000—5000l的水池。水池的建造既可以完全采用砖混结构，也可以从地面直接下挖成坑，铺垫塑料，建成简易水池。
1.4 psb培养方法
将psb原液按2%浓度加入水池内的液体培养基中，搅拌均匀后用地膜覆盖在液体培养基表面密封，使其厌氧发酵富集扩大培养。培养过程中，在发酵池内安放温度计，监测池内温度。池的四周用的白炽灯均匀对称照射，光照强度在2000lx以上，每天更换1次灯光位置，白天也可采用自然光，温度控制在30~37°c，这样经过10~15d即可获得棕红色光合细菌培养液。经镜检计数，培养液中含psb活菌数可达5*106个/ml以上，说明psb培养液扩繁成功，可以直接使用。
2 psb培养液在淡水养鱼中的应用
2.1 净化鱼塘水质
由于psb能进行独特的光合作用，能直接消耗利用水中的有机物、氨氮及硫化物，并通过反硝化作用除去了水中的亚硝酸铵等，因而能使池塘内的残饵及鱼虾贝等生物排泄物完全分解并加以吸收利用。从而大大降低了水中有机物的含量，因此水中溶解氧得以提高而化学耗氧量、氨氮、硫化物则降低。
2.2 作为浮游动物的饵料
psb的菌体细胞营养丰富，是浮游动物的优质饵料，水体中的越多，浮游动物生长也就旺盛，以浮游动物为食的鱼类增产效果也就越明显。
2.3 作为饲料添加剂
psb菌体细胞含有大量的生理活性物质，这些物质对鱼类不仅具有增加营养，降低饲料系数的作用，而且还具有调节免疫系统，增强抗病力和促进生长的作用。
2.4 间接增氧作用
psb生长繁殖时，既不需要氧气，也不释放氧气，但是它可通过吸收水体中的耗氧因子而间接地起到增加氧气的作用，这种作用是非常明显的。
2.5 鱼病防治
使用psb预防鱼病，完全可以克服杀菌剂的缺点，它既可降解和清除水体中包括鱼药在内的有害化合物质，又可与病原微生物争夺营养空间使病原微生物无法进行大量生长繁殖，尤其是不存在耐药性，因此鱼类也就不易发病。
psb代谢过程产生和释放的酶含有消炎和抗病因子，可防治养殖鱼类的烂鳃病、肠道穿孔病、水霉病、赤鳍病等多种疾病。同时psb还含有丰富的b族维生素、辅酶和未知促生长活性物质等，这些物质具有提高鱼体免疫力的作用。此外psb还能与水中益生菌形成有益菌群抑制病菌繁殖，也可起到预防鱼病的作用。如把鱼苗或病鱼放入psb中药浴后可提高其成活率，并且无任何药浴副作用。
3 使用方法及注意事项
第5篇：病菌集中营范文
关键词仔猪断奶；腹泻；大肠杆菌（ETEC）；鉴定；血清型
中图分类号S858.28文献标识码A文章编号 1007-5739（2011）11-0348-03
IdentificationofPathogenicE.colifromPostweaningDiarrhoeaandItsSerotypes
FENG XianGUAN Miao-dong
（Wenling City Animal Husbandry and Veterinary Bureau in Zhejiang Province，Wenling Zhejiang 317500）
AbstractRectum swabs samples from postweaning diarrhoea were collected from large pig farms in zhejiang province.56 pathogenic E.coli isolates were obtained after selective medium culture，Gram stain，biochemical tests，and toxicity tests in mice.Serotypes of 33 isolates were identified by agglutination tests with 11 O antigen standard antiserums，the predominant serotypes were O149、O139、O8.，amount to 51.52%（17 isolates）of all the isolates identified. 37 strains were identified as K88 using fermentation tests of raffinose，MRHA and MRHI（K88ab，8 strains，21.62%），the rest isolates serotypes couldn't be identified when using 4 standard antisera（K88，K99，987P，F41）. These serotypes are different from the common ones reported before.
Key wordspostweaning；diarrhea；ETEC；identification；serotypes
在现代化养猪生产中，为了最大限度地提高母猪的年生产力，养猪业者期望对仔猪实行早期断奶，国外28日龄断奶应用已较广泛，而在国内，哺乳期少于5周龄的早期断奶尚未普及。实施早期断奶，是提高母猪生产性能的关键技术之一，也是整个养猪业提高效率的主要环节。但早期断奶往往会导致仔猪发生断奶综合征，表现出生长阻滞及消化不良，仔猪断奶后腹泻（Post weaning diarrhoea，PWD）等症状[1]。
断奶后腹泻多发生于断奶后2～10 d，是集约化养猪生产中比较棘手的问题，给养猪业造成很大的经济损失[2-3]。Muirhead（1992年）报道，在美国31万头仔猪中断奶腹泻发病率占57%，腹泻造成死亡率10.8%。据统计，杭州市现年产仔猪约300万头，断奶腹泻发病率高达80%，医药费用平均每头2元，但死亡率仍占10%～20%。当发生水样便时，病死率可达30%以上。且仔猪生长缓慢，至60 日龄体重比不发生腹泻的平均要小约1 kg，经济损失巨大。我国是养猪大国，存栏猪逾4亿头，解决仔猪腹泻是提高养猪业总体效益的一个关键问题。
国内外研究表明，引起仔猪腹泻的因素是多方面的，总起来讲可分为感染因素和非感染因素[4]。非感染因素包括仔猪自身机能、饲料与饲养管理、断奶应激、所处环境、化学药物应用等，感染因素包括病原体（病毒、细菌、原虫）等，其中又以肠毒素型大肠杆菌（ETEC）最为重要。肠毒素型大肠杆菌（ETEC）是猪的一种重要肠道病原菌，大肠杆菌O抗原血清型很多，资料报道已确定的有173种，常见致病性大肠杆菌血清型是O8、O138、O139、O141、O147、O149、O157等[5-7]并具有相应的菌毛。菌毛是ETEC的一个重要毒力因子，具有粘附于小肠绒毛上皮的作用，使ETEC牢固地定居于小肠黏膜上，从而导致腹泻的发生[8-10]。
对于仔猪断奶腹泻，目前主要通过早期补料减少断奶应激，降低仔猪饲料中蛋白质水平，应用酸化剂、酶制剂、乳清粉和益生素、砷制剂，口服补液盐以及药物防治等措施。这些措施虽取得了一定的防治效果，但并不理想，且长期以来抗生素的大量使用，造成细菌普遍产生抗药性、动物源食品药物残留超标以及环境污染等一系列问题。近年来，采用免疫学方法防治仔猪断奶腹泻效果良好，但不同地区致病性大肠杆菌血清型存在差异，因此有必要开展病原性大肠杆菌优势血清型的鉴定工作。
引起仔猪腹泻的菌毛类别主要有K88（F4）、K99（F5）、987P（F6）、F41[11]。常规检测肠毒素性大肠杆菌菌毛的方法有电子显微镜观察法，D-甘露糖抵抗血凝与血凝抑制试验、棉籽糖发酵试验、细胞粘附试验和免疫血清学技术和核酸探针技术等[12]。
该项目通过对仔猪断奶腹泻的调查和实验室相应的病原性大肠杆菌的分离纯化、血清型鉴定等试验，探明杭州地区若干大型集约化猪场断奶仔猪腹泻大肠杆菌的抗原特性，并为该病的免疫学防治等研究打下基础。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1培养基。普通肉汤、营养肉汤、三糖铁培养基、普通琼脂培养基、TSB培养基、改良Minca培养基、麦康凯培养基、伊红美蓝培养基。
1.1.2生化鉴定样品与试剂。11种主要致病性大肠埃希氏菌单因子抗O血清，分别为O8、O20、O9、O101、O147、O64、O138、O45、O149、O157、O139，由中国兽药监察所提供，4种（K88、K99、987P、F41）菌毛抗原单克隆抗体；豚鼠、鸡、兔、猪、羊、鸡、牛红细胞，甘露糖生理盐水、0.5%石炭酸生理盐水、柠檬酸钠、0.9%生理盐水。
1.1.3试验菌种。大肠杆菌标准菌株C83901（O8：K87（B），K88ab）、C83902（O8：K887，K88ac）、C83903（O141：K85，K88ab）、C83915（O9：K103，987P：NM）、C83928（O6：K99，F17）购自中国兽药监察所。
1.1.4设备及器材。无菌操作台、分光光度计、离心器、天平、移液枪、5 mL注射器（2支）、8号针头若干、离心管（1.5 mL，5 mL）若干、96孔微量血凝板、肠杆菌科细菌生化编码微量鉴定管，棉籽糖发酵管（由浙江省军区后勤部卫生防疫站生产）。
1.2试验方法
1.2.1病原菌的采集、分离培养和生化鉴定。将采集的病料划线接种于麦康凯琼脂平板。于37 ℃生化培养箱中培养24 h。从麦康凯培养基上挑取单个砖红色菌落再次接种于麦康凯培养基上，37 ℃培养24 h。将纯菌落接种于营养肉汤中，37 ℃培养18 h，获得细菌纯培养物。将纯培养的细菌接种于各种生化鉴定试剂，于37 ℃生化培养箱中培养24 h，并观察结果。
1.2.2致病性测定。分离得到的每1株菌株接种普通营养肉汤，将培养18 h后的培养物接种1只健康小白鼠，腹腔注射0.6 mL，同时1只小白鼠注射普通营养肉汤培养物作对照。在正常条件下饲养观察，记录小白鼠的临床症状及死亡时间。12 h以内致死为强毒菌株，12～24 h内致死的为中等毒力毒株，24～48 h致死的为弱毒株，超过48 h致死和耐过的为微弱毒株和无毒株。血平板上选取强毒株和中等毒力毒株接种于营养肉汤，放于37 ℃温箱培养24 h，观察结果。
1.2.3大肠杆菌O抗原血清型的鉴定。接种待检大肠杆菌于麦康凯平板上，37 ℃培养24 h。取光滑圆整的红色菌落1～2个转接到半固体小管。取半固体培养物分别接种于普通琼脂斜面上，37 ℃培养24 h。用石炭酸生理盐水2 mL洗下普通琼脂斜面小管培养物，置浓稠悬液小圆底试管中，于121 ℃高压2 h以破坏K抗原，制成高压抗原以供玻板凝集试验使用。参照房海[12]的方法进行操作和判定结果。
1.2.4大肠杆菌菌毛型鉴定。①棉籽糖发酵试验。每管接种1个待试菌株，同时设标准菌株及阴性对照管，37 ℃恒温培养4 d，每天观察并记录结果，以产酸（颜色由红变黄）、产气者判为阳性。②MRHA试验。用天平准确称量3.8 g柠檬酸钠，加100 mL；蒸馏水配制成3.8%柠檬酸钠。分别采集豚鼠、鸡、兔、猪、羊等动物的血液，与3.8%柠檬酸钠以9∶1的比例分别制成抗凝血（或脱纤血），用生理盐水以1 000～2 000 r/min离心10 min，洗涤3～4次（上清液无色透明为止），并制备成3%（V/V）的红细胞悬液，4 ℃保存供试。接种标准菌株及分离株于改良Minca培养液中，37 ℃摇床培养24 h。离心菌液（8 000 r/min，5 min）。用生理盐水悬浮，洗3次，至上清液澄清为止。去上清，用适量的含1% D－甘露糖的生理盐水悬浮细菌。取少量670 nm调透光率到10%，定为基础菌悬液。参照房海[12]的方法进行操作。结果判定时以1∶4倍以上稀释菌液仍能呈现明显红细胞凝集（++）者判为阳性，并以仍能使红细胞呈现明显凝集（++）的菌液最高稀释倍数判为该菌株的血凝滴度（血凝效价）。③血凝抑制反应。取普通营养琼脂斜面（或半固体琼脂）培养物，用含1% D－甘露糖的生理盐水洗下菌苔并制备成适当浓度（50亿/mL）的菌悬液供试。用3.8%柠檬酸钠抗凝血（或脱纤血），用生理盐水低速离心洗涤3～4次（上清液无色透明为止），并制备成3%（V/V）的红细胞悬液供试。参照房海[12]的方法进行操作。结果判定时能使4 U（或8 U）菌毛抗原的血凝作用被抑制则判为阳性反应（＋），表明该血清中具有相应抗体或原凝集作用是特异的；反之为阴性反应（－）；以仍能呈现出明显抑制作用的血清最高稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度（抑制效价）。
2结果与分析
2.1病原菌分离鉴定
2.1.1分离纯化培养。病料接种于麦康凯琼脂平扳，于37 ℃温箱培养24 h后形成红色菌落，分离出56株大肠杆菌。涂片染色镜检为革兰氏阴性杆菌，无荚膜，无芽孢。
2.1.2生化鉴定。分离所得56株大肠杆菌的生化试验结果均符合大肠杆菌的生化特征：可水解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖；不分解尿素；还原硝酸盐；吲哚试验和MR试验均为阳性，柠檬酸盐、VP试验阴性。
2.2致病性
2.2.1死亡情况。接种2 h后即有小白鼠呼吸急促、精神不振、呆伏、被毛松乱。5 h之后开始有小白鼠死亡。小白鼠死亡情况见表1。由表1可知，接种后时间＜12 h时，死亡数为15只，毒力等级为强毒力；接种后时间为12~24 h时，死亡数为18只，毒力等级为中毒力；接种后时间为24~48 h时，死亡数为23只，毒力等级为弱毒力；接种后时间＞48 h时，死亡数为3只，毒力等级为微毒力。
2.2.2死亡鼠剖解变化。死亡小白鼠，剖解取其心、肝血划线接种于麦康凯培养基和普通营养肉汤。于37 ℃温箱培养24 h后，麦康凯琼脂平板分离到典型的大肠杆菌菌落，普通营养肉汤浑浊。
2.3大肠杆菌O抗原血清型鉴定
56株供检菌株中有33株定型，分属于11种血清型，以O149、O139、O8为优势血清型，这3种血清型的菌株数占已定型菌株的51.52%（17/33），另有23株未能定型，占分离株的41.07%（23/56）（表2）。
2.4大肠杆菌菌毛型鉴定
2.4.1棉籽糖发酵。标准菌株中除K88外，其他菌株均不能发酵棉籽糖。56株分离株中有37株呈阳性反应，占分离菌株的66.07%。发酵菌株中，发酵能力存在一定差异，从12～72 h不等。
2.4.2甘露糖抵抗血凝及血凝抑制试验。由表3可知，试验得到的各标准菌株的血凝谱比其他报道的更广泛，在一定程度上丰富了原有的血凝谱。同时发现在菌液浓度比较高的情况下，987P对兔、猪、鸡出现轻微的凝集现象。可能原因有：①甘露糖浓度低，不足以抵抗I型菌毛的凝集作用；②987P标准株同时也微弱表达了其他菌毛；③987P可能存在弱血凝性。
由表4可知，各标准菌株与其相应的抗血清均能发生血凝抑制反应，证明MRHI方法的可行性。而分离菌株中，棉籽糖发酵阳性株MRHA试验，有8株可以凝集鸡红细胞。MRHI试验表明：K88抗血清可以不同程度地抑制它们的血凝反应，K99及F41抗血清则不能。棉籽糖发酵阴性的菌株，在血凝试验中对兔血、猪血等表现血凝性，其中A58的血凝性最强，以A58做血凝抑制试验，K88、K99、F41抗血清均不能抑制其血凝反应。
3结论与讨论
根据细菌分离培养特性、生化鉴定结果以及动物致病性试验，证实该试验研究的分离菌株为引起仔猪断奶腹泻的致病性大肠杆菌。从患病仔猪肠内容物中分离出的56株大肠杆菌，致病性都很强。经试验分析，得到的各标准菌株的血凝强度与报道的存在一定的差异。大肠埃希氏菌的抗原类型主要由O、K、H抗原组成。O抗原是血清学分群的基础，每1株大肠埃希氏菌被认为只含有1种O抗原；大肠埃希氏菌的O抗原类群非常多，至今已发现173种之多[13]，但似乎仅有少部分与致病性有关。仔猪断奶腹泻大肠杆菌O血清型国外主要报道有：O108、O138、O141、O147、O157[14]；O138、O139、O141、O147、O157 O16、O108[15]；O8、O138、O139、O141、O147、O149、O157[16]。该试验中56株分离菌株中有33株定型，分属于11种血清型，以O149、O139、O8为优势血清型，这3种血清型的菌株数占已定型菌株的51.52%（17/33），另有23株未能定型，占供检菌株的41.07%（23/56）。
由于试验只采用了11种主要的致病性大肠埃希氏菌单因子抗O血清，分别为O8、O9、O20、O45、O64、O101、O138、O139 、O147、O149、O157。因此，得出的结果所覆盖的血清型必然不够完整，只包含了其中一部分常见的血清型。除与Hampson D J等的报道有一定的相似性外，与其他报道间存在一定的差异。这意味着不同地区ETEC的O优势血清型存在一定差异。
大肠杆菌菌毛类型很多，仔猪大肠杆菌菌毛有普通菌毛，K88、K99、987P、F41、F18等。其中编码大肠杆菌K88基因和发酵棉籽糖基因存在于同一质粒上，大肠杆菌K88+菌毛抗原株表现为发酵棉籽糖产酸产气，而K88-株一般不发酵棉籽糖，所以用棉籽糖发酵试验筛选猪腹泻病例中大肠杆菌K88+菌株，简便易行。王光荣等（1984年）[17]用玻片凝集反应、抗甘露糖血凝试验和棉籽糖发酵试验对K88+及K88-的标准菌株和分离菌株做了对比试验，结果证明K88+均能发酵棉籽糖产酸、产气。对标准株K99、F41、987P、K88做了棉籽糖发酵对比试验，发现只有K88菌株为阳性，说明了该方法的可靠性。试验中，53株供试菌株共有37株呈阳性反应，即K88阳性大肠杆菌有37株。说明K88为常见的菌毛类型之一，与报道[14-16]一致。
大肠杆菌各种菌毛在形态上非常相似，都能介导细菌黏附到肠上皮细胞；但是，它们不仅在血清学关系上各不相同，而且血凝谱也有一定差异[18]。根据血清学关系，K88菌毛被分为K88ab、K88ac、K88ad，3种血清型都能凝集豚鼠红血球。PARRY S H等[19]报道，K88ab还能对鸡红细胞表现MRMH活性，而另外2种血清型不能，该试验也得到了相同的结果。棉籽糖阳性分离株MRHI试验结果表明：K88抗血清可以不同程度地抑制它们的血凝反应，K99及F41抗血清则不能。但在棉籽糖阴性分离株MRHI试验中，K88、K99、F41抗血清均不能抑制其血凝反应，推测可能由于研究中采用的抗血清未包含F18等，分离的菌株属于其他的或者是新型的菌毛类型，具体可采用PCR等方法进一步研究。
PCR方法可从基因水平检测菌毛，不需要对细菌进行菌毛化培养，克服了有些菌株体外培养条件严格的限制。该方法操作简单、快速，对细菌培养物仅需3～4 h即可得出结果；具有很好的特异性和敏感性，10 cfu的细菌即能检出；对各检测菌株的检测结果与血清学反应的检测结果一致[20]。
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第6篇：病菌集中营范文
1 症状
茄子苗期、成株期均可发生灰霉病。苗期发病先从幼苗子叶和下部真叶开始。子叶感病后开始退绿发黄,逐渐变褐枯死,并可扩展到幼茎,使幼茎缢缩变细,折断枯死。真叶染病后出现半圆至近圆形淡褐色轮纹斑,后期叶片和茎秆均会长出灰霉,致病部腐烂。成株期染病,叶缘处出现水浸状病斑,逐渐变褐,形成椭圆或近圆形浅黄色轮纹斑,密生灰霉层,病斑相连常致整叶枯死。茎秆和叶柄染病也可产生褐色病斑,逐渐扩大后呈暗褐色,凹陷腐烂,表面产生不规则轮纹状灰色霉层。
致该病病菌为灰葡萄孢菌,属半知菌亚门真菌。病部产生的灰霉即病菌的分生孢子梗和分生孢子,在条件适宜时可产生菌核。
2 发生规律
该病菌以分生孢子在病残体上或以菌核在土壤中越冬。春季条件适宜时,菌核产生菌丝体,菌丝体产生分生孢子,分生孢子靠气流或农事操作进行传播蔓延。分生孢子在凋萎的花瓣和花托等处腐生,然后侵染花、果实和叶片。从病部产生的分生孢子可再通过气流或农事操作传播,进行多次再侵染。
灰霉病是高湿型病害。相对湿度达80%以上时有利于该病的发生;相对湿度达60%～70%时,不利于病害的发生。该病发生的温度范围为7℃～30℃,连续阴雨,有利于灰霉病的发生。阴雨天气多,光照不足,气温偏低,保护地通风不良,或连作多年的老温室,种植密度大,管理差,有机肥偏少,氮肥偏多,氮、磷、钾比例失调等都有利于灰霉病的发生。
3 综合防治方法
3.1 建立无病苗床 要选择地势高、干燥、背风向阳,排水方便,土壤肥沃,无病菌的地块建立苗床。营养土要从没有种过或3年内没有种过茄子、番茄等蔬菜的生茬地块中挖取,并注意营养土的灭菌消毒。防治方法是:在1000千克营养土中均匀掺入50%多菌灵可湿性粉剂1千克,以杀灭菌源。
3.2 采取营养钵育苗 营养钵育苗既有利于培育壮苗,增强抗病能力,又可避免因分苗移植而造成伤根,减少病菌的侵染。
3.3 棚室灭菌消毒 使用多年的大棚或温室,因菌源积累较多,要用硫磺熏蒸消毒。其方法是:在定植前每平方米空间用硫磺7～8克加15克锯末混匀,于傍晚点燃,密闭熏蒸24小时,效果较好。
3.4 清除病残体 在发病期间,及时摘除病花、病叶、病果、病茎,并随时装入塑料袋中,带到棚外深埋。收获后彻底清除病残体,集中烧毁,并进行深耕,减少菌源。
3.5 加强肥水管理 保护地内应重施腐熟的优质有机肥,增施磷、钾肥,以提高植株的抗病能力。要适当控制浇水,有条件的可采取滴灌技术,禁止大水漫灌。
第7篇：病菌集中营范文
广东省湛江中心人民医院ICU，广东湛江 524037
[摘要] 目的 分析儿童耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染临床特征及其预后影响因素。 方法 选择该院2010年8月—2013年8月住院治疗的10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿为研究对象，收集患儿临床资料，采用spss19.0软件分析找出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染临床特征及其预后影响因素。结果 该研究调查的10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿中，4例患儿为呼吸系统疾病，占40.00%，3例为消化系统，占30.00%，3例为泌尿系统，占30.00%。年龄>3岁(β=-0.99，0R=0.38)是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后差的保护因素，营养不良(β=2.56，0R=12.92)、基础疾病种类>3种(β=2.16，0R=8.68)和侵入性操作>3种(β=1.72，0R=5.61)是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后差的危险因素。结论 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染原发病以呼吸系统疾病主，患儿预后受多种因素的影响，我们应该加强高危患儿的管理，严格无菌操作，注意手卫生，减少耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的发生。
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；医院感染；影响因素；横断面调查
[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）07（c）－0030-02
金黄色葡萄球菌是临床常见的医院感染致病菌之一，严重威胁住院患儿的身心健康，甚至危及患儿的性命[1]。目前，随着抗生素的广泛应用，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染已经成为严重的临床及公共卫生问题。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌也被称作“超级细菌”，是一种对某些种类的抗生素具有耐药性的细菌。自1961年首次发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌以来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离率逐年增加，已成为医院感染重要的革兰氏阳性细菌，并且多重耐药现象日益严重，部分地区已经出现对万古霉素耐药、中介耐药以及异质性耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，给治疗带来巨大的调整。为此，了解儿童耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染临床特征及其预后影响因素具有重要的临床意义。该研究分析该院2010年8月—2013年8月住院治疗的10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿的临床资料，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择该院2010年8月—2013年8月住院治疗的10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿为研究对象。入选条件：①患儿均有感染典型症状；②均找出明确致病菌；③患儿家属无听力、智力、言语交流沟通障碍；④患儿家属愿意参加该次研究，在开展资料收集前先与患儿家属签订书面知情同意书。排除标准：①患儿家属存在精神分裂症等影响承担完全民事行为能力的疾病；②患儿正在接受临床药物试验；③患儿家属不愿意参加该次研究。其中，男性6例，女性4例；年龄为4～14岁，平均年龄平均(6.98±3.23)岁。
1.2 方法
1.2.1 标本采集与处理 根据患儿病情留取患儿痰液、血液、尿液和大便等，第一时间送至检验科。
1.2.2 细菌鉴定 送检标本于接收到标本后30 min内接种到琼脂培养皿和强颗粒培养皿中，后将其置于5%CO2培养箱中孵育24 h，观察琼脂培养皿和强颗粒培养皿中细菌生长情况，并全自动微生物分析仪进行菌中鉴定。采用KB法(KB试纸购自英国OXOID公司)进行药物敏感试验，操作和结果判断参照美国临床实验室标准化协会标准来进行，同时，采用PAATCC27853和大肠埃希菌ATCC25922（卫生部临检中心提供）进行质量控制。
1.2.3 资料收集方法和内容 查阅
参考文献[2-5]，制定自编问卷并将其应用于收集我院住院治疗的10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿的临床资料，资料收集员采用自愿报名的方式招募，在进行问卷收集前，先对其进行培训并进行一致性检验。调查内容包括如下：性别、年龄、营养不良、基础疾病种类、侵入性操作、抗生素使用时间、抗生素使用种类、家属对患儿照顾情况等临床资料。
1.3 预后评价标准
经过积极治疗，患儿死亡认为预后差，其他均视为预后可或好。
1.4 统计方法
采用SPSS19.0软件包对数据进行分析。采用t检验和χ2检验分析计量资料和计数资料，双侧检验。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌发生影响因素采用二分类Logistic回归分析。
2 结果
2.1 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染患儿临床特征
该研究调查的10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿中，4例患儿为呼吸系统疾病，占40.00%，3例为消化系统，占30.00%，3例为泌尿系统，占30.00%。
2.2 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后多因素Logistic回归分析
以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后好坏(好=0，坏=1)为因变量，以性别、年龄、营养不良、基础疾病种类、侵入性操作、抗生素使用时间、抗生素使用种类、家属对患儿照顾情况等为自变量，赋值后进行多因素Logistic回归分析，α入＝0.05，α出＝0.10，结果发现：年龄>3岁(β=-0.99，0R=0.38)是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后差的保护因素，营养不良(β=2.56，0R=12.92)、基础疾病种类>3种(β=2.16，0R=8.68)和侵入性操作>3种(β=1.72，0R=5.61)是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后差的危险因素，见表1。
3 讨论
随着抗生素的广泛应用，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌呈现明显上升的趋势[1]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物均表现耐药，给患儿临床治疗带来很大挑战，与乙型肝炎、获得性免疫缺陷综合征被列为世界范围内三大最难解决的感染疾患。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染与众多因素有关，既有外源性因素，也有内源性刺激：①感染防治制度不健全有关：与医院感染防治制度不健全有关，或者有制度，但未做到有效的执行；②医院感染预防控制工作重要不够：医务人员对染预防控制工作重要性认识不足，院感相关控制措施落实不到位；③患儿自身因素有关：儿童年龄小，全身各个器官尚未完全发育，全身抵抗力差，易感耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；④其他：患儿自身营养状况也与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染有关。此外，侵入性操作、介入性治疗手段和抗生素不合理应用等也是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的危险因素。
该研究发现：4例患儿为呼吸系统疾病，占40.00%，3例为消化系统，占30.00%，3例为泌尿系统，占30.00%。年龄>3岁(β=-0.99， 0R=0.38)是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后差的保护因素，营养不良(β=2.56，0R=12.92)、基础疾病种类>3种(β=2.16，0R=8.68)和侵入性操作>3种(β=1.72，0R=5.61)是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染预后差的危险因素。考虑可能与以下因素有关：①患儿年龄较小则各项器官功能发育均较差，患儿的细胞及体液免疫功能无法将耐甲氧西林金黄色葡萄球菌第一时间彻底清除，明显影响耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染患儿预后；②患儿基础疾病种类种类越多则患儿患儿机体抵抗力明显下降，不能发挥功能抵御病原菌的侵袭，明显影响患儿预后；③侵入性操作>3种是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染患儿预后差的危险因素，侵入性操作破坏了患儿固有的天然免疫屏障功，异物的植入为细菌定植提供了机会，增加患儿感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的几率，威胁患儿身心健康，甚至危及患儿性命。
2011年美国感染病学会（IDSA）的 MRSA感染治疗指南认为，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌所致的单纯脓肿行切开引流术可能是合适的，抗生素使用需更多的资料来明确其作用，减少对患儿的侵入性操作。而该次研究通过对10例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌患儿调查说明多种侵入性操作可能会严重影响患儿预后效果，由于多重侵入性操作可能会严重危害患儿的免疫功能，为细菌的植入提供了机会，再加上医务人员的不注意，极有可能导致患儿感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的风险，关于侵入性操作这一点，该次研究结果和2011年美国感染协会关于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的结论是一致的。
综上所述，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染原发病以呼吸系统疾病主，患儿预后受多种因素的影响，我们应该加强高危患儿的管理，严格无菌操作，减少侵入性操作，注意手卫生，减少耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的发生。
参考文献
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[3] 董玉梅，周新，周凤玲，等.神经外科耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的临床调查[J].中国临床神经外科杂志，2010，15(8):468-470.
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[7] 陆权.儿童耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的治疗对策[J].中国实用儿科杂志，2010，25(1):10-13
第8篇：病菌集中营范文
【关键词】 食物中毒；细菌；检验
[中图分类号]R155.3+1[文献标识码]A[文章编号]
食物中毒属于常见的突发公共卫生事件，在各种类型的食物中毒中，又以细菌性食物中毒最为多见。根据属地管理原则，食物中毒的检验任务主要由基层疾控中心承担，而全国大多数基层疾控中心由于缺少如PCR仪、全自动细菌鉴定仪、荧光酶标免疫测试系统等先进的检验设备，对细菌性食物中毒的检验依然采用传统的培养来完成[1]。虽然传统的分纯鉴定方法是细菌性食物中毒检验的“金标准”，但其检测周期长，不能满足日益严峻的处置突发公共卫生事件需要和人民群众对公共卫生服务的需求。本文从建立预案、物资人员准备、现场调查、样品采集、病原菌检验等方面，对基层疾控中心如何提高细菌性食物中毒检验的检出率和缩短检测周期提出自己的体会和观点。
1建立预案
实验室应建立并健全自己的食物中毒检验预案，对采样材料和物资的准备、人员分配、样品采集、各种食物中毒病原菌的检验方法、生物安全、实验室质量控制、后勤保障等方面进行明确规定，落实责任，做好处置细菌性食物中毒的应急动员。
2物资、人员的准备
实验室必须常规配备各类样品的采集材料、常用的培养基、微量生化管或生化试剂条、常用的诊断血清，并保证在有效期内；对不常用的采样材料，细菌鉴定所用的试剂、试纸条也应适量储备。从事细菌性食物中毒检验工作的检验人员需经过专业知识和专业技能的学习，并能胜任检验工作的实际需要。
3现场调查
检验人员应参与食物中毒的现场调查，分析食物中毒病人的临床症状、可疑食物、可能的病原菌、可能的传播途径，了解病人的血、尿常规检验结果。一般情况下，正常人白细胞总数(4～10)×109/L，当细菌性感染引起菌血症时白细胞总数大于10×109/L（伤寒除外），中性粒细胞大于80%，其他分类无特殊改变；当病毒感染时白细胞总数正常或降低（乙脑除外），且淋巴细胞升高。通过参与调查，检验人员可以初步判断病原菌种类、可能的病原菌、重点样品等。
4样品的采集
由于法律观念淡薄，缺乏法律意识，食物中毒发生后消费者通常不是首先向卫生监督部门及时报告疫情，而是先与经营者交涉，在不能如愿情况下才向卫生监督部门举报。从而造成经营者会人为处理掉一切可疑剩余食物，对加工经营现场、工具、容器也会做相应处理。另外，细菌性食物中毒有特定的潜伏期，一般5～10 h，最短1～3 h，有时当卫生监督人员到达现场时，可疑食物、加工现场已被清理，采集的剩余食物也可能不是当日餐桌上的。最后，中毒病人发病后，患者一般会被使用抗生素，忽视了用药前呕吐物或排泄物的留存，大量的抗生素会影响病原菌的繁殖，从而降低检出率[2]。以上3种情况是检验人员采样时常遇到的难题，是影响食物中毒采样的及性、代表性的最主要因素。所以，加强食品卫生法宣传和严格食品卫生管理制度势在必行。首先，应加强《中华人民共和国食品安全法》的宣传，普及食品卫生相关知识；其次，实行较大规模（50人及以上）酒宴行政审批制度，并对高危食品实行24 h留样制度；再次，依法取缔不具备卫生条件的卤菜加工作坊；最后，卫生监督部门要加强同各级卫生医疗单位的联系，医疗机构在工作中要认真履行食物中毒报告制度。另外，细菌性食物中毒采样的另一问题是采样没有规范化。基层疾控中心检验值班人员可能不是专职负责细菌性食物中毒的检验人员，采样技能参差不齐，由专职检验人员编制采样作业指导书和采样技能培训是有必要的。细菌性食物中毒样本包括两大类―环境样本和生物样本，在下结论时，前者参考价值大于后者。样本采集对象通常为肛拭子、呕吐物或剩余食品，在没有呕吐物或剩余食物情况下，可以在食具、用具、冰箱内壁等处采集样品。若病人已使用抗生素且不允许停药，应考虑争取获得病人配合采集病人静脉血，若培养为阴性，应多次多部位采样。采样时严防杂菌污染，严格无菌操作，采样完成后应立即送检。
5检验方法
5.1 增菌 增菌可将样品中菌量较少的病原菌检出，也可以使服药患者样品中被抗生素抑制的细菌获得复苏和达到增加菌量的作用。在处置细菌性食物中毒实际工作中，肛拭子稀释液可以略过增菌而直接涂抹平板，以缩短检验周期。呕吐物、剩余食品病原菌相对较少，其增菌后再检验对提高检出率是有必要的。
5.2优势菌的观察 对采集的液体样品直接涂片、固体样品用生理盐水磨匀后涂片，进行革兰染色。镜下观察染色反应、形态一致的，数量上占优势的细菌；同时暗视野下观察动力。根据形态、染色反应、动力可初步判断属哪类细菌，对下一步确定检验思路具有很好的指导意义。粪便是细菌性食物中毒检验的理想样本，由于病原菌含量多，直接选用选择性培养基也可较易分离到病原菌，在次日的第一时间观察结果。呕吐物、剩余食品杂菌含量多，病原菌菌落在平板上相对较少，可结合流行病学调查结果和粪便培养结果，确定可疑典型菌落。
5.3 分离培养 一直以来，基层疾控中心对食物中毒病原菌的分离培养都是选用国家标准的分离培养基来完成，也被实践证明了其具有很好的效果。
5.4 生化试验 传统的生化鉴定采用双歧索引法，该法较烦琐、检测周期长，不能满足处置突发事件的“应急”需要。现多采用数码法，在细菌性食物中毒中常用的有肠杆菌科细菌生化编码鉴定系统、弧菌科细菌生化编码鉴定系统、API细菌鉴定系统和rRNA第Ⅰ超科细菌数值编码鉴定系统（Rr1-11）等。
5.5 血清学凝集试验 血清学凝集实验时需注意诊断血清的有效性，当效价降低或吸收不完全时常出现错误结果。若形态、培养特性、生化反应符合某菌，而血清不凝或凝集结果与形态、培养、生化不符合时，可用不同批号或不同生物制品研究所的血清加以对照，不能轻易否定。另外，除熟知的Vi抗原和K抗原外，在沙门氏菌的鉴定中还应注意M抗原和O5抗原的阻断凝集；在志贺氏菌、副溶血弧菌的鉴定中应注意K抗原的阻断凝集作用。
6讨论
(1)按国家标准的传统分离鉴定方法一直以来是细菌性食物中毒检验的“金标准”，在基层疾控中心也一直沿用至今，但其检测周期过长且此问题难以克服。某些条件好的基层疾控中心购置了全自动或半自动细菌鉴定仪，改善了传统生化方法检测周期长的缺点。
(2)现今基层疾控中开展细菌性食物中毒检验的项目主要有沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌和副溶血性弧菌，若这些菌没有检出，往往就会不了了之。所以，扩大检验范围对保障行政区域内的食品安全和疾病控制是有必要的。考虑到检测成本、各类细菌引起食物中毒的发病率和已有的检验效能，扩大检验范围也是可行的。比如基层疾控中心可以大力开展致病性大肠埃希氏菌、变形杆菌和单核细胞增生性李斯特菌的检测。致病性大肠埃希氏菌的检测方法简单、成熟；而变形杆菌检验虽然目前尚无国家标准，现今其检验方法引用最多的是《变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则WS/T 9-1996》，该法雷同肠杆菌属其他细菌的检验，将他们纳入细菌性食物中毒的必检项目是可行的。单核细胞增生性李斯特菌的检测方法较繁琐限制其推广的最大障碍，基层疾控中心可纯培养后送上级疾控机构检验。
(3)在处置细菌性食物中毒实际中，基层疾控中心时常不能确定传染源、传播途径和传播范围，给消灭传染源、切断传播途径、控制传播范围带来了一定的困难。条件好的基层疾控中心已经装备脉冲场凝胶电泳（PFGE）仪，能特异性地对病原菌进行分型，从而确定食物中毒的传播途径，为从根本上预防细菌性食物中毒的再次发生提供技术支持。但由于仪器过于昂贵，操作较为复杂，无法在基层疾控中心普遍推广。因此，开发出成本较低的分型技术具有重要意义。
参考文献
[1] 何金林,夏铁瑛,陈燕,等.基层疾控中心细菌性食物中毒检验探索.中国预防医学杂志,2006,7(5):392-393.
第9篇：病菌集中营范文
【中图分类号】 R 179 G 478.2 R 595.7
【文章编号】 1000-9817(2007)11-1041-01
【关键词】 沙门菌，肠炎；食物中毒；流行病学研究；学生
2006年11月26日16∶30至27日21∶00，绍兴市某学校28名学生不同时点进食校内某个体小卖部出售的零食――“老北京鸡肉卷”，其中15名学生于27日12∶00至28日15∶00相继出现发热、腹痛、腹泻等症状。根据流行病学调查、临床表现、潜伏期和实验室检验结果，认为是一起肠炎沙门菌引起的急性细菌性食物中毒。现将结果报道如下。
1 流行病学调查
1.1 基本情况 11月26日下午，设在该校内的个体小卖部收进标注为“绍兴某西饼屋”11月26日加工的“老北京鸡肉卷”14只，连同11月24日进货剩余的“老北京鸡肉卷” 5只，共19只，陆续销售给在校学生。11月27日12∶00进食“老北京鸡肉卷”的1名学生出现发热、腹痛、腹泻等症状，至11月29日12∶00出现类似症状被送入医院诊治的学生有24人。事发后尚剩5只11月26日加工的“老北京鸡肉卷”。经对可疑病人发病前72 h内的进食情况进行统计，发现发病者均于11月26日至27日进食了校内的个体小卖部出售的由“绍兴某西饼屋”11月26日加工的“老北京鸡肉卷”，此外无共同食物(指在同一场所进食或进食同一种食物)。根据临床表现和实验室检验结果，最终确定有15名病例是进食“老北京鸡肉卷”引起的食物中毒。
1.2 人群及时间分布 15名发病者中，年龄最小的18岁，最大的20岁；男性13人，女性2人。首例发病时间为11月27日12∶00，末例为28日15∶00；根据发病者进食可疑食物的时间，潜伏期最短为2.3 h，最长为20.5 h，平均为12.7 h。
1.3 现场卫生学调查 该校内的个体小卖部持有效食品卫生许可证，所进货物均由某超市指定供应。该小卖部收进 “老北京鸡肉卷”后存放于室温为13℃的货架上，没有污染病原微生物的可能。进一步调查发现，“老北京鸡肉卷” 实际是绍兴市另一地某面包加工店冒牌加工，该冒牌加工店也持有当地有效食品卫生许可证，但加工场所、加工品种超出核准范围，加工过程中禽蛋未清洗，冻鸡肉靠自然解冻约2 h，加工环节存在污染病源微生物的可能。
2 临床表现
主要症状为发热12例(80.0%)，体温37.5 ℃～40.0 ℃，平均39.0 ℃；腹痛10例(66.7%)；腹泻11例(73.3%)，每日3～20次，平均5.6次，粪便为黄水样便(8例，占53.3%)；恶心8例(53.3%)；呕吐9例(60.0%)；头痛6例(40.0%)；头晕4例(26.7%)。血常规检验显示，白细胞计数超过正常参考值11例(73.3%)，中性粒细胞百分比超过正常参考值13例(86.7%)。发病者经抗炎、对症治疗后，症状缓解康复，病程为1～5 d。
3 实验室检查
现场采集校内个体小卖部剩余的标注为“绍兴某西饼屋”11月26日加工的“老北京鸡肉卷”1份，另采集可疑病人粪便(或肛拭)样品21份。分别检验沙门菌、志贺菌、致泻大肠埃希菌、副溶血性弧菌。上述检验依据GB/T 4789-2003进行。
在15份病人粪便或肛拭样品中，检出5株肠炎沙门菌，检出率为33.3%；在该校内的个体小卖部剩余的“老北京鸡肉卷”中检出肠炎沙门菌，与病人粪便或肛拭样品中检出的肠炎沙门菌为同一血清型。
4 讨论
调查结果显示，15名发病者唯一共同的食物为“老北京鸡肉卷”；发病时间集中在11月26日“老北京鸡肉卷”加工出售后一段时间内，停止食用后无新病例出现；发病潜伏期较短，曲线呈迅速上升突然下降的单峰型；发病者具有相同的发热、腹泻、腹痛和白细胞计数、中性粒细胞百分比超过正常参考值等细菌性食物中毒的特有临床表现；未发现病例之间相互传染现象。上述特征符合食物中毒的诊断要点。实验室检验发现，5名发病者肛拭或粪便样品和剩余的“老北京鸡肉卷”中检出同一血清型的肠炎沙门菌，提示此次事件的发病者为同源性一次感染所致。结合发病者发热、腹痛、腹泻的临床表现以及发病者的潜伏期资料，符合沙门菌食物中毒的诊断标准(WS/T 13-1996)和判定规则[1-2]。因此，可以认定该次事件的致病因素为肠炎沙门菌。
学校小卖部是日常监管的薄弱环节。尽管采用了连锁加盟经营的良好模式来改变日益分散、难以自律的食品经营现状，全是仍不免有定点供货单位违规作业导致食品污染的情况发生。本起中毒事件提示，连锁配送中心应加强对供货单位的管理，尤其是现场加工管理。卫生监管部门也不能因连锁加盟经营而放松监督指导。本起中毒事件发生后，地方政府立即启动了食品安全应急预案，按照国务院分段管理的规定，工商、技术监督、卫生部门迅速查控了与中毒零食相关的加工场所和流通渠道，事态在最短时间内得到控制，体现了部门联动的积极效应。然而也暴露出诸多协调沟通的老问题，对卫生部门依法取证、处理带来困难，如零售商、加工商的执照、台帐去向不明，可能污染的食物流通去向不明，其他部门查封的产品批次、数量不明等，以致事件主要肇事者去向不明也无部门控制的结局，应引起大家的重视。
4 参考文献
[1] 陈炳卿，刘志诚，王茂起，主编.现代食品卫生学.北京：人民卫生出版社，2001：768.