去卵巢小鼠学习记忆能力探析
【摘要】目的观察去卵巢（OVX）小鼠学习记忆能力及脑超微结构的改变。方法12只雌性C57BL／6小鼠随机分为假手术组（SHAM组），去卵巢组（OVX组），造模后继续喂养12w。采用Morxi＾JC迷宫测试认知能力，透射电镜检测小鼠大脑超微结构的改变。结果与SHAM组对比，OVX组小鼠的逃避潜伏期显著增加（P＜〇．〇5），穿越平台次数显著减少（P＜0．05）；0VX组小鼠海马神经元出现明显的超微结构改变，包括核膜破裂、核仁边界不清；线粒体数量减少、体积增大；高尔基体肿胀变大等。结论0VX小鼠的学习记忆能力下降，可能与海马超微结构的改变有关。
【关键词】去卵巢小鼠；海马；超微结构
更年期最常见的症状之一是认知障碍和记忆障碍。先前的研究已经表明，随着绝经后雌激素水平的降低，老年痴呆症和记忆损害的风险会增加［1］。卵巢切除术后，由于雌激素缺乏，小鼠的学习和记忆受影响［3］。因此本实验观察去卵巢小鼠（ovariectomized，0VX）学习记忆能力及大脑海马神经元超微结构的变化，探讨绝经后发生认知减退的可能机制。
1资料与方法
1．实验动物、试剂与仪器
12只健康，12wC57BL／6雌性小鼠，由西安交通大学实验动物中心提供。3％戊二醛（广州市化学试剂厂），Morris7jC迷宫（上海吉量科技公司），透射电镜（JEM－1400，日本）。
2．动物分组及模型制备
手术操作按参考文献［4］进行，手术前禁食12h，腹腔注射1％戊巴比妥钠麻醉小鼠，俯卧位固定，消毒；手术组，摘除卵巢。假手术组在没有切除卵巢的情况下，进行了同样的手术。实验过程符合西安医学院伦理委员会指定的实验动物伦理学要求。3．Morris水迷宫实验术后喂养12w，两组小鼠进行Morris水迷宫实验，上下午各2次，两组小鼠分别从4个不同的人水点放人水中，记录两组小鼠寻找平台所需的时间（2min内）。撤除平台，将两组小鼠从任一入7jC点放入7jC池，记录跨越平台的次数（lmin内）。
4．小鼠海马苏木精－伊红染色
固定标本苏木精浸泡5min，2次，7jC洗30s，伊红溶液浸泡30s，梯度乙醇脱水，透明处置，封片，倒置光学显微镜观察和拍片。
5．海马组织电镜观察
将切割成1mm3的小鼠海马组织置于3％戊二醛溶液中。41；处置2h，PBS溶液漂洗，置于1％四氧化锇溶液中41固定，梯度醇脱水，置换，浸泡，包埋，聚合，光学显微镜定位，超薄切片，醋酸铀、柠檬酸铅染色，透射电子显微镜观察、照相。
6．统计学方法
采用SPSS21．0统计软件，用（元±s）来表示数据。采用配对i检验，以P＜〇．〇5为差异有统计学意义。
2结果
1．Morris水迷宫实验结果（表）
结果显示0VX组逃避潜伏期为（23．554．21）s，显著长于SHAM组（12．793．26）s，（P＜0．05）；0VX小鼠跨越平台次数为（1．890．78）次，显著少于SHAM组（5．980．99）次，（iM）＿05）。
2．小鼠海马病理改变比较（图1）
通过苏木精－伊红染色观察，SHAM组小鼠海马CA1区神经元结构完整清晰、排列整齐、层次清晰，呈3￣5层；0VX组海马CA1区神经元数量减少、层次不清，层数减少，细胞松散，间隙增加。
3．小鼠海马神经元超微结构的改变（图2）
SHAM组小鼠海马神经元超微结构无异常改变。0VX组海马神经元出现明显的病理性超微结构改变，包括核膜破裂、核仁边界不清、周围间隙增大；线粒体数量减少、体积增大；高尔基体肿胀变大等。
3讨论
衰老会影响认知功能的各个方面，随着年龄的增长，认知能力下降的风险也会增加。有证据表明，随着年龄的增长，记忆等认知功能会受到影响，这可能与大脑某些区域的神经元丧失有关［5＜。一般来说，大多数患有阿尔茨海默病的患者是女性，而且女性患认知障碍的风险比男性高。尽管这种差异可能与女性寿命的延长有关，但绝经期雌激素的急剧下降也可能导致这种情况。研究显示长期丧失卵巢功能可显著增加神经系统疾病引起痴呆和死亡的风险［7＿11］0本文通过Morris水迷宫实验发现，0VX组小鼠的逃避潜伏期增加，跨越平台次数减少；说明去卵巢后，由于雌激素缺乏，小鼠的学习和记忆均受损，与之前的研究一致［12＿13］。苏木精－伊红染色发现0VX组小鼠海马CA1区神经元呈现层次不清、排列紊乱、神经元数量减少、细胞松散、层数变少等病理性改变，该结果与Guan及Ma的实验研究结果一致［14＿＇透射电子显微镜观察结果显示，0VX组海马神经元细胞器出现明显的超微结构病变，表现为核膜破裂、核仁边界不清；线粒体数量减少、体积增大；高尔基体肿胀变大、空泡等。OVX组神经元结构的病理改变及神经元细胞器超微结构的改变，可能是导致OVX组小鼠学习记忆能力受损的重要原因之一。综上所述，本研究发现OVX小鼠的学习记忆能力下降，可能与海马超微结构改变有关。
作者:魏明 田甜 刘鹏 甘露 单位:陕西省人民医院妇科