TCT制片质量控制研究

摘要：目的进行液基薄层细胞学（TCT）制片质量控制，提高细胞学检测的特异性和诊断的准确率。方法分析我院7018例妇科液基细胞学病例，对制片过程（取材、制片、固定、染色、封片）进行质量控制，有宫颈上皮细胞异常者做病理组织学检查。结果TCT优片率99.6%（6989/7018），3例不满意标本。部分细胞学阳性病例进一步在我院行阴道镜检查并取活检，LISL、HISL和鳞状细胞癌的细胞学与病理组织学符合率分别为71.88%（23/32）、90.90%（10/11）和100%。结论TCT制片质量控制有利于提高宫颈病变的诊断，TCT在宫颈病变的筛查无损伤，易操作，敏感性高，可作筛查宫颈癌的检查。

关键词：宫颈肿瘤；TCT技术；筛查；质量控制

引言

液基薄层细胞学（TCT）技术的应用为细胞病理医生提供了高质量的标本，亦是临床妇科作为宫颈癌早期筛查诊断的重要手段[1]。液基薄层细胞学（TCT）标本制片质量控制是准确发现病变的前提，它包括标本收集、涂片制备、固定染色等。为更好地将TCT技术服务临床诊断，现分析7018例TCT检查标本结果，以探讨提高TCT标本质量的方法。

1资料与方法

1.1一般资料。

收集本医院病理科2013年10月至2014年10月行宫颈脱落细胞TCT检查的标本7018例，主要来源于本院妇科门诊患者及体检中心体检者。不满意标本3例，重新取样合格后进行检测。患者年龄17-88岁，临床表现多为白带异常、外阴瘙痒、接触性出血、宫颈炎等，部分病例无症状行体检。

1.2方法。

1.2.1标本采集：

妇科医师先拭去过多的白带或宫颈口的血液后，用采样刷插入宫颈管内，轻缓施力顺时针旋转5周，不留死角，收集宫颈口的脱落细胞，将宫颈刷放入盛有保存液的小瓶内，送病理科检测。

1.2.2涂片制备：

TCT制片是自动制片涂片，开启Thinprop2000机器，将放有保存液的标本瓶放入固定槽，套上过滤膜，通过机器的搅拌分散细胞、采集、转送细胞[2]，利用真空虹吸作用将细胞均匀喷涂在经静电处理过的玻片上，并自动将玻片送入固定瓶，固定液采用95%乙醇，固定时间十五分钟以上。对于多血性及多粘液标本的处理，可经离心震荡制作涂片。

1.2.3涂片染色：

采用巴氏改良染色法，按顺序从95%酒精固定15分钟，水洗，浸入改良Gill半氧化苏木素2min，水洗，1%氨水返蓝1min，水洗，浸入95%酒精1min，桔黄G10s，95%酒精IIIIII各10s，浸入EA50染液1min，95%酒精IIIIII各10s，无水酒精IIIIII各2min，浸入二甲苯IIIIII各2min，中性树胶湿封。

1.3细胞学诊断。

采用TBS分类标准[3]：无上皮内病变或恶性病变（NILM）；意义不明的非典型鳞状细胞（ASCUS）；不除外高度鳞状上皮内病变的非典型鳞状细胞（ASC-H）；低度鳞状上皮内病变（LSIL），包括人乳头瘤病毒（HPV）感染和宫颈上皮内瘤变（CIN）I级；高度鳞状上皮内病变（HSIL），包含CINII级、CINIII级或中重度异型增生及原位癌（CIS）；鳞状细胞癌（SCC）；非典型腺细胞（AGC）；腺癌。该分类系统也对标本质量进行评估，对微生物和炎症程度或萎缩等分别加以描述。TBS报告正常或炎性反应作为细胞学阴性，ASCUS及以上病变为细胞学阳性。

1.4优等片诊断标准。

据子宫颈细胞学Bethesda报告系统第二版[4]规定：一张质量好的TCT片最低细胞数量至少需要有5000个保存完好和形态清晰的鳞状细胞。片子干净，色彩鲜艳，无气泡，封胶适量，镜下细胞核、质清楚，角化细胞、非角化细胞一目了然，有助于诊断，此为优等片。

1.5分析方法。

以优等片为标准，分析不满意片子的原因以及改进方法，进行质量控制。细胞学阳性者行阴道镜检查，在阴道镜下对病变处取材做病理活检，后行常规制片，HE染色，光镜下观察。对检查的结果进行分析并以病理活检诊断的结果为标准与细胞学进行对照。

2结果

2.1制片结果。

7018例片子中，有6989例达到优等片这个标准，优片率99.6%（6989/7018）；29例不满意片子原因如下：5例制片染色太淡，核红，原因是Gill苏木素染色时间短，或返蓝时间过短，或染液（包括桔黄G和EA50液）使用时间过长，采取延长Gill苏木素返蓝时间，或更换染液可达到优等片标准；3例染色太浓，染色时缩短染色时间可达到优等片标准，或采用1%盐酸酒精分化；1例封片有气泡，二甲苯浸泡至盖玻片自动脱落，重新封片达到优等片标准；20例血液和粘液过多，用Cytolyt液和离心机、震荡仪多次处理后再制片，17例达到优等片标准，2例血液、粘液过多导致细胞量太少和1例取材收集细胞太少，放弃诊断，要求重新取材。

2.2细胞学诊断结果。

NILM伴或不伴炎症者6688例，95.30%，ASC-US173例，2.46%，ASC-H12例，0.17%，LSIL76例，1.08%，HISL29例，0.41%，SCC1例，AGC8例，0.11%。2.3组织学诊断结果。76例LISL有32例在本院行阴道镜检查，组织学23例符合，9例慢性宫颈炎，符合率71.88%；29例HISL有11例在本院行阴道镜检查，组织学10例符合，1例CINI，符合率90.90%；1例SCC行阴道镜检查，组织学为宫颈中-高分化鳞癌，符合率100%。

3讨论

近年液基制片技术的出现大大提高了宫颈癌及癌前病变的检出率[5]，TCT是有效的宫颈癌筛查技术，克服了传统涂片的缺陷。本研究表明，绝大部分TCT制片达到了优等片标准，有助于诊断，减少了重新取样的病例数。而小瓶中剩余的可用于后续的检测，如HPV、免疫组化、分子病理等辅助性检查[6]。但TCT的假阴性，假阳性诊断任客观存在，所以从标本采集、制片、染色等技术过程介绍如何提高TCT的制片质量，有效降低TCT假阳性和假阴性。

3.1标本采集。

子宫颈上皮的CIN和子宫鳞状细胞癌大多累及子宫鳞状上皮和柱状上皮交界处，即移行带[7]，所以标本采集应采集到病变部位和宫颈的移行区（鳞柱交界区）细胞。检查前准备：①3天内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗；②24小时内不应有性行为；③检查应在非月经期内进行。具体取样步骤：①由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈；②将宫颈刷的尖端放入宫颈内口，两边紧贴颈管外口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转5圈；③慢慢取出宫颈刷，将其放入标有病人编号的小瓶中，小瓶内已加有专用细胞保存液，拧紧瓶盖；④送检样本到病理科。注意标本采集时，先轻轻擦拭过多的白带或宫颈口的血液，涂片中除鳞状上皮细胞外，必须见到柱状上皮细胞或化生的鳞状上皮细胞。细胞数，有效细胞成分，供诊断细胞太少或太多红细胞等因素均可造成假阴性结果。

3.2标本保存固定。

取材后将细胞立即放入放有保存液小瓶里，瓶盖旋紧，以免倒漏。制片完毕后立即固定，TCT的保存液是一种良好的防腐剂，对细胞有一定的固定作用，但仍未达到固定效果，制片后必须用标准浓度95%乙醇固定，使细胞形态保存更完好。固定液量还必须充足，新鲜，保持有效浓度。

3.3标本制备。

制片时，如果遇到粘液和血液过多的标本，应采用Cytolyt液和离心机多次处理再制片，以达到优等片标准。如红细胞较多，大红瓶可以加入1:9的冰醋酸震荡离心处理后制片；如粘液较多，若成块的粘液用镊子取出后再制片；糊状严重者倒出部分，加保存液（大绿瓶）至小瓶的上下线。对粘液、血液实在太多的标本，要求重取材。本文3例标本粘液、血液实在太多，重新取材。

3.4标本染色。

细胞学的常规染色方法有巴氏染色、苏木素-伊红（HE）染色、瑞氏（Wright）染色、迈-格-姬（MGG）染色(8)，巴氏染色法常用于测定细胞雌激素的水平，所以宫颈细胞用巴氏染色法更理想。染色失败的补救：巴氏染色时遇到染色质量不佳或片子长期存放而退色时，可按以下程序处理后重染：把片子浸泡在二甲苯液内，直到盖玻片自动脱落，然后片子放入二甲苯内充分浸泡，使树胶完全融掉。依次放入无水乙醇和95%乙醇中，各2min后放入流水中漂洗，直到胞质颜色完全脱落干净为止。再放入0.5%盐酸酒精中分化至显微镜下观察细胞核颜色完全退掉，最后水洗，重新染色，染色时间需要根据不同环境温度进行调节。冬季温度较低时延长染色时间，夏季温度高时，应缩短染色时间。本文结果提示应不断提高制片技术，加强并逐渐完善细胞形态学检查的质量要求与控制，准确诊断率可反应一个单位团体及其诊断者的细胞学水平和准确率。同时，会诊和借片有利于交流和借鉴，建立细胞学涂片档案室，涂片阴性标本至少要保存1年，阳性标本保存5年以上[9]。不断提高技术质量，既需要实验室规范的操作技术，又需要一定的病理学基础知识，所以必须高度重视和加强对专业人才的培养。

参考文献

[1]潘秦镜.液基细胞学筛查宫颈癌的研究[J].中华肿瘤杂志，2001；23（4）：311.

[2]张威.新百氏TCT技术特性与应用[J].临床医学工程杂志，2008，15（9）：48-53.

[3]SolomonD,DaveyD,KurmanR,etal.The2001Bethesdasystem：terminologyforreportingresultsofcervicalcytology[J].JAMA,2002,287(16):211-2119.

[4]黄受方，张长淮，余小蒙.子宫颈细胞学Bethesda报告系统[M].北京：诊断病理学杂志社，2004:2-3.

[5]吴坤河，赖日权，张佳立，等.宫颈癌液基细胞学筛查与组织学检查的对比[J]。实用癌症杂志，2005,20（1）：99.

[6]刘国素.液基薄层细胞检测（TCT）在宫颈疾病普查中的应用[J].山东：第七届全国细胞病理学学术会议论文摘要.2007,6.

[7]李玉林.病理学[M].北京:人民卫生出版社，2012:262.[35].

[8]全国卫生专业技术资格考试专家委员会.病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2009.11.

[9]漆明,蒋庆军，韦海春,等.液基细胞学标本制片、染色及诊断技术的质量控制[J].右江民族医学院学报，2009,31（3）:467.

作者：邓晓红 石新兰 李振强 崔铁莉 贾静 李玉广 张宁 林经萍 单位：北京市石景山医院病理科  北京市石景山医院妇产科