医学细胞生物学实验报告精选(九篇)

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第1篇：医学细胞生物学实验报告范文

关键词：荧光素酶；绿色荧光蛋白；活体成像；乳腺癌

近年来新兴的活体成像技术为生物医学研究提供了新的平台。其可从细胞或亚细胞水平对体内的生物学过程进行直观观察和量化分析，具有操作简单，灵敏度高，无创性，观测结果的直观性和连续动态性等特点[1-2]ENREF1。 相对于荧光素酶生物发光成像较强的特异性和高信噪比，荧光成像应用于活体内时因其需要激发光源而造成较强的背景噪音，灵敏度较低，而用于体外细胞及组织标记具有一定优势。利用荧光蛋白和荧光素酶对细胞或动物进行双重标记，前者可用于体外检测和细胞生物学观察，后者用来进行活体动物体内追踪研究[3-4]ENREF1。本研究构建了稳定表达萤火虫荧光素酶-绿色荧光蛋白（Fluc-eGFP，DF）的人乳腺癌MDA-MB-231细胞系，并在NOD/SCID小鼠建立乳腺癌皮下移植瘤模型，并应用活体成像示踪监测标记的乳腺癌细胞在小鼠体内的分布、存活及增殖。

1资料与方法

1.1一般资料 细胞，质粒和实验动物：人乳腺癌MDA-MB-231细胞系购自ATCC，人胚肾细胞系293T， Flu-eGFP慢病毒表达质粒（图1）由南开大学医学院免疫学实验室惠赠。6～8周龄健康NOD/SCID雌性小鼠，购自北京大学医学部实验动物科学部，饲养于SPF级环境。

1.2试剂及仪器 DMEM 培养基，Fluc底物luciferin，活体成像设备（IVIS 200），流式细胞仪。

1.3方法

1.3.1慢病毒的包装 将生长旺盛的293T细胞以1*106的密度接种在6孔板内。细胞密度达到90%融合度进行转染。将转染试剂和三种慢病毒包装质粒混合，静置20 min后加入293T细胞培养孔内，4 h后添加2 ml全培养基，16 h后换液，换液24 h后收集病毒上清。

1.3.2慢病毒感染MDA-MB-231细胞及阳性细胞的筛选 将231细胞以10%的密度接种在六孔板内，加入1ml慢病毒上清，2 ml DMEM培养基，24 ug Polybrene。常温下1600 r/min离心1 h。换成全培养基培养扩增。用流式分选出GFP表达阳性的细胞群。荧光显微镜观察GFP的表达情况。

1.3.3 Fluc-eGFP标记的MDA-MB-231细胞GFP和Fluc表达分析 利用流式细胞术检测构建的231-DF细胞系中GFP表达率。231-DF细胞消化后分别以不同梯度的细胞密度接种入6孔板内。培养1 d后应用活体成像仪检测Fluc的表达。成像时向6孔板每个孔内加入500 ul底物溶液（1：100稀释），扫描时间1 s。用living imaging 软件分析处理数据。

1.3.4小鼠皮下移植瘤模型的建立 将培养的状态良好的231-DF细胞消化，制备单细胞悬液，调整细胞数为2×107/ml，用水合氯醛麻醉小鼠，100 ul上述细胞悬液注射至小鼠两侧肩部皮下。

1.3.5活体成像监测移植瘤的生长状况 自接种第2 d起，每7 d应用活体成像检测接种小鼠体内Fluc发光信号，研究移植瘤的生长情况。每只小鼠成像前腹腔注射200 ml的荧光素酶底物，气体麻醉后放入样本暗箱内成像，扫描时间30 s。

2结果

2.1慢病毒感染231细胞及阳性细胞的筛选 荧光显微镜下观察231细胞转染率在80%左右。流式分选出GFP阳性细胞群，GFP表达率在95%左右，经传代扩增5次后表达率无明显变化，见图2。

2.2 231-DF细胞Fluc表达分析 在6孔板连续的5个孔内，随着细胞密度依次递增，荧光信号的强度也依次增强（图3）。说明我们用DF标记的231细胞表达的Fluc蛋白在体外能够使用活体成像检测到。以荧光信号强度对细胞数做一线性回归分析（图3），R2=0.99，表示荧光强度与细胞数之间存在线性正相关。上述结果提示Fluc的信号强度可作为测定活细胞数的标准。

2.3小鼠皮下接种成瘤及活体成像 NOD/SCID小鼠皮下接种经231-DF细胞约2 w后接种部位出现肿瘤结节，所有实验小鼠均接种成功，随时间推移，移植瘤呈圆形或椭圆形生长。于接种第2 d起，成像1次/w，观察到Fluc信号强度随时间增强，提示小鼠体内移植瘤的生长（图4）。

3讨论

慢病毒介导的基因转染能够使外源性基因整合入宿主细胞基因组内，对转录沉默作用有较强的抵抗能力[5]，本实验中DF基因在MDA231细胞内能得到长期稳定的表达，可准确的反映肿瘤细胞在实验动物体内的生存状态。报告基因DF表达eGFP-Fluc融合蛋白，因此可在体外以GFP筛选表达阳性细胞群，建立稳定细胞系。用流式细胞仪进行GFP表达分析，发现连续传代5次后，GFP阳性细胞的比例维持在95%左右。融合基因的优势在于既可进行活体内成像研究、也可从体外验证所标记细胞的分布和功能，结果证明，对于稳定转染了DF基因的细胞系，活体成像的荧光强度与细胞数成正比。

本研究采用慢病毒转染技术，建立了稳定表达双融合eGFP-Fluc蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231细胞系，在NOD/SCID小鼠建立乳腺癌皮下移植瘤模型，利用活体成像监测荷瘤小鼠体内肿瘤细胞的存活和增殖。结果提示双报告基因标记技术为进行体内移植瘤成像提供了较大便利。可用于活体成像的小鼠皮下移植瘤模型为乳腺癌相关机制及治疗研究提供了直观，准确的平台。

参考文献：

[1]王丽婷，孙玮，冉海莹，等.活体动物光学成像技术与应用研究[J].医学信息，2015（1）.

[2]刘静静，胡晓俊，李征然，等.Luciferase2/mKate2双报告基因对小鼠骨髓间充质干细胞的标记及活体光学成像研究[J].中山大学学报（医学科学版），2014，35（3）.

[3]程凯.荷瘤鼠活体成像研究进展[J].医学综述，2011，17（21）.

第2篇：医学细胞生物学实验报告范文

关键词：生物学实验；方法改进；中西医结合

医学生物学是中医院校的基础课程，是一门实践性很强的学科。实验教学是医学生物学教学过程中重要的组成部分，实验教学效果的好坏直接影响课堂教学的效果和学生对医学生物学的兴趣。高年制的医学生是各医学院校重点培养的高层次医学人才，因此，对他们的要求远远高于五年制学生，除了要求他们掌握全面扎实的专业知识外，还要求他们具有较高的科研素质、创新能力和实践能力，进而全面提高高年制学生的综合素质，培养学生分析问题、解决问题的能力。基于此，实验教学改革成为我们教学的重点。笔者综合分析目前我室的生物学实验教学过程，除了基本的医学生物学实验外，还开设了现代生物学实验技术课，这门实验课主要包括细胞培养、细胞传代和染色体显带等实验；在进行观察体外培养细胞的基本形态这个实验时，对该实验进行几个方面的改革，主要包括对实验教学方法、实验内容设计和实验具体操作进行改进，经调查，改革后实验教学效果较好。

一、实验教学方法改革

观察体外培养细胞的基本形态这个生物学实验的目的有两个：一是掌握倒置显微镜的使用方法；二是让学生了解细胞的基本形态结构和体外培养细胞的生长状况。这样，有助于学生理解细胞是生命有机体的基本结构单位。针对这个实验目的，我们采用多媒体教学和国内外文献教学相结合，从体外培养细胞的形态特征类型开始讲解，结合不同细胞的图片，逐步讲解。同时，结合实物演示（培养瓶中装有不同时间的培养细胞）给学生讲解体外培养细胞的生长状况和细胞培养中的污染情况，使学生对这个实验先有感官认识，然后让学生自己设计实验。

二、实验内容设计

在实验内容设计过程中，我们首先对实验室的实验条件和经费进行考虑，然后结合高年制学生的实际条件进行实验设计。我校高年制的学生在进行现代生物学实验技术学习时，已经完成了基本的医学生物学实验，如显微镜的观察、蟾蜍的解剖等基本实验，所以，在进行现代生物学实验技术时已经具备了一定的知识水平。高年制的学生分两组进行这个实验，每组为21人，结合我室的实验条件，倒置显微镜只有一台，要完成这个实验而且效果要好必须进行以下的实验设计：（1）细胞的准备：培养瓶细胞的准备和24孔板细胞的准备。（2）盖玻片的无菌准备。（3）细胞固定试剂的选择。（4）显微互动实验室进行固定细胞的观察；倒置显微镜进行培养瓶细胞的观察。（5）进行实验结果的分析、讨论。

三、具体操作步骤的改进

实验内容设计好以后，进行具体的操作步骤：（1）将21个学生分为7组，每3人1组。（2）以往实验是利用培养瓶培养细胞，但是只有一台倒置显微镜，所以改为24孔板内放置盖玻片培养细胞。（3）每组进行培养细胞前准备。首先各组进行盖玻片的无菌处理，然后将无菌的盖玻片放入24孔板内。（4）各组进行24孔板内细胞接种培养，即爬片。（5）将有细胞的盖玻片取出，各组进行固定。（6）第一组、第二组采用丙酮固定；第三组、第四组采用95%乙醇固定；第五组、第六组采用甲醛固定；第七组采用甲醇冰醋酸固定。（7）在显微互动实验室进行细胞形态的观察。（8）交叉进行倒置显微镜下观察培养瓶内的细胞。实验完成后进行实验报告的书写，内容包括实验原理、实验目的、实验设计及实验结果的讨论等。学生将固定的细胞和未固定细胞的形态观察进行讨论分析，讨论的过程较热烈，有的学生提出的问题特别有意义，这样既可以让每个学生参与实验，同时，又增强了同学提出问题、解决问题的能力。

针对观察体外培养细胞的基本形态这个实验，我们进行了以上这几个方面的改进，使学生在教学过程中的各个环节都主动参与并不断地提出新的问题。在这个过程中，学生得到锻炼的同时，教师也在教学中得到了学习，扩展了知识面。实验教学是树立学生实践观念，培养分析、解决实际问题能力， 启迪学生创新思维，提高学生综合素质的重要环节。所以，在实验教学过程中，我们要不断地进行探索和改革，这样更有利于培养学生的新能力和科研素质。

参考文献：

[1]李健，苗绪红，李光.七年制医学生细胞生物学实验双语教学的实践与思考[J].山西医科大学学报：基础医学教育版，2007，9（4）：465-466.

[2]倪秀珍，莫金钢.普通生物学实验课程教学改革尝试[J].长春师范学院学报（自然科学版），2008，27（3）：136-137.

第3篇：医学细胞生物学实验报告范文

［关键词］ 尿液；有形成分；显微镜检查；尿干化学；尿流式分析

1 尿液有形成分检测的意义

在尿液形成过程中，泌尿道常有组织的脱落物和细胞渗出，尿离体离心或自行沉降，其沉降物称为尿沉渣，是尿液中的有形成分，包括细胞、管型、细菌、霉菌、结晶、药物等。尿沉渣检查是尿液分析的重要组成部分，以往直接将尿离心，取沉渣在显微镜下检查，称为“尿沉渣检查”［1］，而目前开展的流式原理自动化检查方法，无需离心即可直接分析尿中有形成分，称为尿有形成分分析［2］。近年来强调分析尿中所有颗粒，即细胞、管型、细菌、霉菌、结晶、药物等。尿液有形成分分析可确定进入尿路中的细胞种类，如红细胞增多常提示尿路出血，进一步检查红细胞形态则有助于确定血尿来源；白细胞增多则提示尿路感染；不同尿路上皮细胞增多有助于判断各种尿路病变部位。管型增多则提示肾小球肾炎、肾小管(远端，集合管病变)及肾功能减退，所以说尿液有形成分分析可反映泌尿系统各部位的变化，协助对泌尿系统疾病进行诊断、定位、鉴别及预后判断等，为泌尿系统疾病诊断提供可靠依据。难怪有人称尿沉渣检查为“体外无创性肾活检”［3］。

2 传统尿液有形成分的检验

尿液有形成分分析有多种方法，而目前临床常用的包括显微镜检查法、干化学方法和流式细胞法。传统的离心后显微镜检查法，即取混匀的新鲜尿液10 ml于一刻度管内，用回转半径15 cm的水平离心机以1 500 r/ min(RCF=378 G)沉淀5 min，取出离心管倾去上层液体使剩约0.2 ml，混匀管底沉淀物，用吸管吸出沉淀物的20 μl，滴于载玻片上，用盖玻片覆盖后镜检。先用低倍镜(10×10倍)观察全片，再用高倍镜(10×40倍)仔细观察，细胞以高倍镜所见最低和最高数字表示，管型以低倍镜所见最低和最高数字表示［4］。这种传统方法受操作者主观影响误差较大，重复性差，判断不标准，不易定量，报告结果不利于临床动态观察，是缺乏标准化的实验方法。

3 干化学对尿液有形成分的初筛

20世纪80年代，90年代临床上大量使用干化学分析仪方法，尿干化学分析仪对尿中红细胞、白细胞检测是应用化学方法进行的。对尿中白细胞的测定是基于中性粒细胞胞浆内含有酯酶，可催化吲哚酚酯分解出吲哚酚，后者再与重氮盐反应呈现紫色复合物，其颜色深浅与细胞多少呈比例关系，但淋巴细胞不含酯酶，则不与淋巴细胞发生反应。此外高比重尿，尿中含有头孢霉素、庆大霉素、四环素、硼酸、草酸也可致假阴性。尿中含有里甲醛、呋喃坦啶及大量胆红素，氧化型清洁剂则可致假阴性。尿干化学分析仪对红细胞测定是利用血红蛋白(Hb)具有过氧化氢酶样活性，可使过氧化氢茴香素或过氧化氢稀枯分解出［O］，后者能氧化色原使其显色，它既可测完整HBC，也可测游离Hb，此法最大问题是受易热酶干扰。在尿液中常存在类过氧化酶性的物质，其具有Hb相同的氧化色原的作用，造成红细胞结果偏高或出现假阳性。对尿中细菌的检测主要基于尿液中细菌能产生的亚硝酸盐含量，只有尿中致病菌含有硝酸盐还原酶时，且尿中含有适量硝酸盐，允许细菌与尿液充分作用(在膀胱停留间隔＞4 h)，否则试验将出现假阴性［5］。干化学分析仪灵敏度较高，相对特异性较差，假阳性较多，只能作为患者诊断的初筛，不能作为确诊的依据。干化学分析对尿中红白细胞的检查不能代替显微镜，大量的临床试验证明，只有在干化学结果尿蛋白，尿亚硝酸盐，尿白细胞(WBC)，尿RBC结果均为阴性且尿液来自非泌尿系疾病患者，才可视为尿液中的RBC，WBC数量在参考范围内可免于镜检［6］。尿有形成分分析是尿常规检验的核心，具有非常重要的临床价值，而要获得有价值的实验资料，就必须实行标准化、规范化的尿沉渣检查。

4 尿液有形成分的标准化建议及参考值

中华医学检验分会于2002年出台了：“尿沉渣检验标准化建议”［7］。建议对材料和器械、标本的收集及运送，尿沉渣检验的操作步骤，应报告的尿沉渣内容等均进行明确规定。如容器、离心管、尿沉渣计数板、离心机(水平式)相对离心力在400 g左右，显微镜则要求有内置光源，光线强度可调，应具备40倍、10倍的物镜和10倍的目镜，并对标本运送，标本接收均作了明确规定。添置K0Va板或FastRead10即可完成。由于操作统一，结果准确，报告一致，是值得推荐的尿沉渣检查法。国内丛玉隆应用一次性计数板标准镜检法对国内6座城市，9家医院，3 757例健康人随机中段尿定量计数，发现红细胞：男性0/μl～4/μl(儿童)，0/μl～4.5/μl(成人)，女性0/μl～6/μl(儿童)，0/μl～7/μl(成人);白细胞：男性0/μl～3/μl(儿童)，0/μl～6/μl(成人)，女性0/μl～4/μl(儿童)，0/μl～14/μl(成人)，上皮细胞：男性0/μl～2.5/μl(儿童)，0/μl～3.25/μl(成人)，女性0/μl～3.8/μl(儿童)0/μl～28.0/μl(成人)［8］，该结果为尿有形成分检查规范化、标准化推广和临床应用提供了依据。我国但目前实际条件下，实验室人员少，工作量大，要使用规范的镜检步骤准确、及时地发出报告是比较困难的。最好寻找一个简单的、快捷的方法进行过筛，即将完全正常的标本筛去后，对异常标本进行规范性检查是可行的。

5 尿流式对尿液有形成分的检验

随着自动化仪器的应用，为尿有形成分定量提供了新的方法。Sysmex公司生产的UF-50，UF-100尿液分析仪是根据流式细胞术设计的专门用于尿沉渣检查的仪器。该仪器所用尿液不用离心，经荧光染色后，应用鞘流技术将尿中有形成分单个有序通过检测系统。根据检测后发出的荧光强度和在前向角测定的散射激光强度以及脉冲的大小综合分析，报告尿中的有形成分种类和数量，仪器可自动报告红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、细菌5个定量参素数，还可测出尿液电导率指标。另外，研究表明，如果采用定量报告方式(C/μl)，最好采用不离心多数量计数法［9］。尿液离心镜检是将尿液离心再悬浮后镜检计数的一种方法，可能受到离心部分变形溶解或离心沉淀不完全等因素影响，要比实际理论值明显减低［10］。UF－100作为一种尿有形成分流式定量计数仪器，最大检测速度每小时可达到100个样本，用于成形成分快速筛选，进行标本常规定量是适合临床应用的。在大工作量环境下，即保证了检验速度又保证了检测质量，为临床诊断提供了可靠依据［11］。

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6 尿液有形成分检验方法比较

总的看来，显微镜检查方法是尿液有形成分的金标准，在目前仪器分析细胞仍存在许多局限性，产生疑问时必需镜检确诊，但它费时，重复性差，结果随意性大，不易定量，受操作者主观影响，判断不标准，结果不利于临床动态观察。干化学方法具有所需尿量少，操作方法简便，检测速度快，重复性较好，对几项化学成分分析从定性进入半定量报告方式，但它对有形成分检测有一定局限性，尿液中存在一定量的干扰物质，可导致检测结果呈假阴性或假阳性，只适合于临床的初筛工作。尿流式细胞分析仪方法具有标本无须离心，检测速度快，病理成分敏感度及重复性好，且由于每份标本检测步骤模式一致便于质量控制及标准化，但它不能检出滴虫、脂肪滴、病理及药物结晶，也不能识别肿瘤细胞，当尿中存在大量细菌、酵母菌、结晶等颗粒可干扰红细胞计数，也不能识别影型红细胞及病理管型［12］，见表1。

表1 尿液有形成分主要3种检测方法比较（略）

传统手工镜检法由于操作要求高、费时，且不能定量报告结果。随着尿液检查方法的规范化、标准化，尿有形成分定量法测定已被推广。目前可采用尿液干化学分析，尿流式分析仪(UF-100)，尿沉渣手工镜检三者相结合的检测方法。以UF－100型尿流式分析仪和尿液干化学分析作为过筛手段，能够在3小时以内将住院患者尿液标本检测完毕，符合“尿沉渣显微镜检查标准化建议”规定，保证了检验质量并大大提高了工作效率。真正实现了尿沉渣从理化检查到沉渣检查全程自动化，将同一检测目的的几种主要方法有机的整合在一起，对同一份标本的不同方法结果(干化学、尿流式、沉渣计数)进行模式匹配，方法学优势互补，特别是干化学的快速简便和尿流式细胞分析仪对有形成分定量分析的准确性及自动化，从而可以有效地降低手工镜检地劳动强度。采用干化学和尿流式进行过筛不是取消镜检而是更好地镜检，往往仪器给出异常结果，要靠显微镜检查来验证、校准和补充，这样的工作流程是科学的，检验结果是有保证的，是符合检验医学发展趋势的。

参考文献

［1］ 孙荣成，王鸿利.临床实验诊断学［J］.333.

［2］ 顾可梁.尿有形成分分析几个问题［J］.临床检验杂志，2006，24(1)：74.

［3］ 顾可梁.尿有形成分的识别与检查方法的选择［J］.中华检验医学杂志，2006，28：572575.

［4］ 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.第3版.东南大学出版社，1997：133.

［5］ 师丽华.尿液干化学分析干扰因素及排除方法［J］.九江医学，2002，17(2)：122124.

［6］ 从玉隆，秦小玲.既要发展现代技术，也要继承经典方法［J］.中华检验医学杂志，2005，28(2)：129130.

［7］ 从玉隆.尿液沉渣检查标准化建议［J］.中华检验医学杂志，2002，25：249250.

［8］ 从玉隆，马俊龙，岳秀玲，等.中国健康人尿液显微镜法测有形成分结果调查［J］.临床检验杂志，2006，24(2)：8184.

［9］ 李雅娣，邱方成.UF-100全自动尿沉渣分析仪临床应用及影响因素分析［J］.微循环杂志，2005，15(4)：145146.

［10］ 从玉隆，马俊龙.尿液细胞成分定量分析方法学研究［J］.中华检验医学杂志，1997，29：234.

第4篇：医学细胞生物学实验报告范文

    原告：从某某。

    被告：南京市鼓楼医院（以下简称鼓楼医院）。

    1997年9月18日，原告从某某因发现右乳房包块而入住被告鼓楼医院普外科，入院时 诊断为“右乳包块待查：右乳腺小叶增生症？”拟行手术治疗。术前，鼓楼医院对从某某进 行了穿刺细胞学检查和各项术前常规检查，未发现其有手术禁忌症。9月23日，鼓楼医院普 外科全科医生对手术方案进行术前讨论，因不能排除包块有恶变的可能，故决定建议从某某 进行“右乳包块切除术+快速冰冻切片检查”，如快速冰冻切片病理报告诊断包块为恶性肿 瘤，则拟行“右乳癌改良根治术”。同日，医院就该手术方案向患者亲属予以告知，从之亲 属表示同意并签字。9月25日，医院对从实施手术。术中，医院先将从右乳包块及周围乳腺 组织切除并送病理室做快速冰冻切片诊断，约一个半小时后，快速冰 冻切片病理诊断从右乳包块为恶性肿瘤，医院当即将此结果告知从之亲属，并说明需对从施 行“右乳癌改良根治术”，从之亲属对医院提出的此手术方案表示同意，并再次签字。医院 当即对从施行了根治术，将从之右乳及周围相关组织全部割除，并将根除组织的标本送院病 理科检验，整个手术过程顺利。从某某恢复正常，于10月6日出院。术后，鼓楼医院病理科 对从 的右乳改良根治标本又进行了免疫组化病理检验，结论为从之右乳包块为侵袭性颗粒肌母细 胞瘤，根据免疫组化的结果可排除乳腺癌。后医院结合快速冰冻切片病理诊断结果及免疫组 化病理检验结果，出具了对从右乳包块的病理报告书，报告书认为：从右乳包块为侵袭性颗 粒肌母细胞瘤，属低度恶性或境界恶性，手术切除后不必做其他治疗，但须紧密随访。

    从某某在得知了免疫组化的病理结论后，将其所获的病理切片送交多家医院检验，数家医院 的病 理报告均诊断从的右乳包块非恶性肿瘤。据此，从某某认为：鼓楼医院的快速冰冻切片病理 诊断 失误，导致其右乳组织被全部割除，医院的治疗行为存在重大过失。为此，向南京市鼓楼 区医疗事故鉴定委员会申请医疗事故鉴定。该委鉴定认为：本病例为右乳腺颗粒（肌母）细胞 瘤。颗粒细胞瘤是一种比较少见的软组织肿瘤，在乳腺组织上发生极少见，据省肿瘤医院、八一医院和鼓楼医院被切除乳腺瘤组织病理诊断回顾，以往没有遇过。此次又在快速冰冻切 片情况下，病理组织类似乳腺癌的改变，确定颗粒细胞瘤诊断是有较大难度的。但鼓楼医院快速冰冻切片病理报告明确为恶性肿瘤是不严谨的。侵袭性颗粒肌母细胞瘤有恶变倾向，原则上可以做根治术，但术前应征得患者或家属的同意。因根治术前不能确定侵袭性颗粒细胞瘤 ，而未能如实征求患者及家属意见，行右乳房改良根治术，客观上违反了病人的意愿，手术 扩 大化，对病人造成了一定程度的损害。鉴定结论：本例不属于医疗事故范围。从某某不服上 述鉴定结论，向南京市医疗事故鉴定委员会申请重新鉴定。该委鉴定报告认为：本病例为右 乳腺颗粒（肌母）细胞瘤：“颗粒细胞瘤”是罕见的软组织肿瘤，国外文献中报导的仅有数百例，其中的“恶性颗粒细胞瘤”更是极为罕见，截止1996年世界上仅报道了36例，且多为个 例报导。国内外权威专家（EZENGER和张仁元）论述其生物学行为属来源未确定，良恶性质难以准确界定的少数肿瘤之一，目前病理界命名各异，标准不一，恶性形态难以在显微镜水平 认定。鼓楼医院（1）快速冰冻病理术中口头报告为“恶性肿瘤”，10月6日书面报告再次诊断 .其本身涵义为：未肯定为乳腺腺癌；难以排除低度恶性的可能。但临床按常规理解为乳腺癌导致手术扩大，病理诊断者与术者均有欠完美之处；病理口头诊断可附带说明其形态的特殊不典型性；临床也应考虑患者年龄、婚姻状况及“恶性肿瘤”的涵义的广泛性，适当选择 手术范围。（2）颗粒（肌母）细胞瘤与侵袭性颗粒细胞瘤为术后诊断差异，未对手术方式的选择产生影响。综上，颗粒（肌母）细胞瘤是一种极为罕见的病例，目前在国内外学术领域对其 生物学行为均未能完全界定，现在的病理诊断学认知水平难以对此病例予以精确认定，就世界上目前对此病变的研究发展，南京地区的诊疗水平以及快速冰冻切片检查的局限性等因素 综合考虑，本病例虽有手术范围扩大的后果，但当事病理医师无过失行为。鉴定结论为本例不属于医疗事故。

    从某某不服医疗事故鉴定结论，于1999年6月29日向南京市鼓楼区人民法院提起诉讼。诉称 ：因被告的病理医师误诊原告的右乳包块是乳癌，而导致原告的整个右乳被割除，原告为此 痛不欲生。现要求被告承担其过错责任，并对原告由此而产生的经济损失共计人民币245405 .90元予以赔偿，另须赔偿原告精神损失费共计人民币20万元，并由被告承担本案的诉讼费用。

    被告鼓楼医院辩称：原告所患右乳包块是侵袭性颗粒肌母细胞瘤，即为低度恶性肿瘤 .被告根据对该肿瘤的治疗需要并征得原告亲属的同意，对 原告施行了右乳癌改良根治术，被告的行为没有任何过错，且通过对原告的手术治疗，排除了原告今后再遭受右乳肿瘤恶变损害的可能，是为了原告更长远的健康利益着想。原告仅从 自身的形体美观角度出发，指责被告，被告对此不能接受。请求法院依法驳回原告的诉讼请求。

    审 判

    南京市鼓楼区人民法院受理案件后，依法收取了原、被告各方所持有的全部病理切片，并委托北京市肿瘤医院对双方提交的切片进行病理诊断，以鉴定：（1）双方各自持有的病理切片是否为同一病例组织的切片；（2）该组织肿瘤的类别及性质。北京市肿瘤医院的病理科接收 委托，对所有病理切片进行会诊后，出具了病理检查报告，报告中写明：（1）送检切片为同一病例组织切片；（2）肿瘤组织形态符合颗粒细胞瘤，细胞异型性不显著，核分裂现 象不多见，但部分区域与周围界限不清楚，有侵袭性生长趋向。并说明，确定恶性颗粒细胞 瘤，主要根据细胞异型性，核分裂相多少。更为重要的是肿瘤的生物学行为。另该院在回答法院咨询时提到，原告送交的切片中有不好的组织状况存在，被告送交的切片中发现不好的组织更多些，且程度更坏些，据现状，肿瘤恶变的倾向是存在的。

    另对被告的具体操作行为，以举证倒置的原则查明：原告入院时即由住院医师对其进行了全 面的体格检查，并有初步诊断，入院后住院医师针对其右乳包块又做了具体检查，诊断同于初步诊断，并准备择期手术。术前，被告对原告进行了穿刺细胞学检查和各项术前常规检查 ，组织全科医师对原告的病情进行了讨论，拟定了手术方案，对手术方案的具体实施步骤均 有明确意见，并向原告亲属告知了手术意见，获同意后施行了手术，手术按拟定的方案实施 ，无异常。术后，原告安返病房，被告对原告予以护理，无异常现象发生。原告恢复正常后 即出院，出院时，被告嘱其定期随访。

    本案原告所患颗粒肌母胞瘤是一罕见的软组织肿瘤，其又称颗粒细胞瘤，以Diss于1927年报 告一舌前部肿瘤命名。至今，国外文献中报告仅数百例，其中恶性颗粒细胞瘤则更为少见， 截止1996年世界报告仅36例。该肿瘤属少数来源未确定、良恶性质难以准确界定的肿瘤之一 ，目前病理界对此肿瘤形态命名各异，标准不一。恶性颗粒细胞瘤有两种类型，一类表现为 临床恶性、组织学良性；另一类表现为临床和组织学均为恶性。目前较公认的恶性标准是： 1.病理形态良性，但临床复发或有转移；2.体积大于4-5cm，核分裂2/10HPF，有梭形细胞瘤 ，核大并核仁明显，有坏死，生长迅速或复发，此六种现象不必全部具备。目前国内对此肿 瘤的病理研究较权威的专家即是上海医科大学肿瘤医院的张仁元教授。而本案被告提交的上 海医科大学肿瘤医院的病理会诊报告单即是经该院病理科会诊后由王懿龄教授和张仁元教授 签发。该报告具体描述：“（右乳腺）肿瘤细胞呈大多边形，富于胞浆，伊红色，颗粒状，细 胞核呈圆形或卵圆形，大小不一，较大核内见核仁，常见双核细胞，核分裂相平均1/10HPFs ，有病理性核分裂，肿瘤细胞在纤维脂纺组织内呈侵袭性生长……”会诊意见：“（右乳腺） 恶性颗粒细胞瘤。目前，临床对于侵袭性颗粒细胞瘤可同于恶性颗粒细胞额瘤采用根治术， 也可针对患者的具体情况，考虑在适当范围内切除。上述事实，应予认定。

    综合以上事实，一审法院认为：本案原、被告间属医患关系，在此关系中，院方作为具有专 门知识和技能的专家而赢得患者信赖，故院方在进行执业活动时，负有高度注意、救死扶伤 及努力完成工作任务的义务。这些义务有些是医疗服务合同所约定的，有些则是职业道德 、行业规范、法律的要求。如在执业过程中，违反上述义务给他人造成了损害，则应承担责 任。这种责任是一种过错责任，须符合侵权行为的构成要件，即要具备行为违法、患者有损害后果存在、违法行为与损害后果有因果关系、主观上有过错。但在具体认定行为的违法及 主观上的过错时，必须将医疗行业习惯及惯例、现有医疗科学技术的实际发展状况作为重要 的考量情节，以一个合格的医护工作者所应有的专业知识和技术水平来判断。结合本案的具体情况，分析被告的行为，本院认为，首先，因原告所患肿瘤的罕见及特殊，被告在术前不 能 排除肿瘤恶变的可能，故按行业习惯及惯例采用术中快速冰冻切片诊断，对此方案，被告术前进行了慎重讨论，尽到了应尽的注意义务，且向患者亲属予以了必要告知，亦尽到了告知 义务。被告对原告在术前进行了常规及必要的检查，术中的操作及术后护理亦按规程要求 履行，无异常现象。据此，本院认定被告对原告实施的医疗行为符合规范及行 业习惯。其次，因我国目前对该肿瘤研究的技术水平尚不能对该肿瘤的良恶性有较明确的判 断标准，且该肿瘤恶性表现形式复杂，故快速诊断难以达到精确程度。经过对双方提交的病 理报告的审查，本院认为，被告提交的病理报告更具科学性。医学科学是极为复杂的学科， 对同一病例，医师因学识、经验、认识差异而可得出不同的印象和判断，尤其对于一些罕见 病例，则判断差异更为显著。因此，对本案的特殊罕见肿瘤的认定应以倾向性的诊断意见 和 该研究领域的权威意见相结合作为判断标准。本案涉及的这两类意见均共同认为该肿瘤细胞 有符合恶性标准的形态存在，权威的意见则更为明确，认为该肿瘤为恶性肿瘤，故本院在综 合各医生、专家的意见，并从科学性、严谨性、可信性几方面对双方提交的病理报告进行审查判断的基础上得出结论，认为原告右乳包块中的肿瘤至少应是具有恶变倾向的肿瘤，据此可认定被告出具的快速切片病理报告没有达到精确诊断的要求，但并不能视为误诊或错诊，在 此诊断的基础上实施根治术亦符合行业惯例。被告的行为不存在违法，其主观亦无过错，且 术后被告又对该病例进行了进一步的病理检测，并如实出具了详细报告，此亦体现了被告对 该 病例诊疗的科学态度，尽到了其应尽的合同义务和法定义务。据此，本院认为被告不应承担责任。但本案所涉及的整个治疗行为的不完美之处亦是客观存在的，具体在于因术中未能精确诊断为侵袭性颗粒肌母细胞瘤，故未能最大限度地尊重患者最客观的意愿，手术方案的选 择亦不是在最精确真实的诊断前提下进行，未能充分考虑患者是一未婚女性而行最恰当的手 术，使患者及亲属在术后得知有关情况与术中了解的情况不完全相符合，即对术后的现实有 无法接受的焦虑和痛苦，并为弄清真相而奔波，经济上亦承受了一定的负担。因此，本院认为，对此不完美，非被告主观有过错或行为违法造成，而是目前医学科学对该肿瘤的诊疗水 平及 技术局限造成，若要求由被告承担此局限性的后果，势必不利于医学科学的发展，从社会公 平的角度考虑亦显不妥。对原告而言，客观上其身体受到损害，但在目前医疗水平不能同时 对患者的生命健康及身体完美并重予以保护时，医者的职责及患者的根本利益均要求对 生命 健康的保护是首要的、根本的，对患者身体的保护须以不丧失生命健康为成就条件，故原告 虽然右乳缺如，但此并不能视为医疗行为的损害后果。原告因此治疗而承受的不利影响应是 一种因病情诊断差异而产生的对术后现实不能接受的痛苦。对此虽然被告行为及主观无过错 ，但原告承受的此不利影响除与其自身的认识因素有关外，与被告治疗行为的不够完美亦 有客观的因果关系，故被告可给予原告一定的经济和精神上的补偿。

    综上所述，依据《中华人民共和国民法通则》第九十八条、第一百零六条第一款、第二款之 规定，该院于2000年10月2日判决如下：一、驳回原告从某某的诉讼请求；二、自本判决生效之日起三日内，被告南京市鼓楼医院给予原告从某某经济补偿计人民币1 万元整，精神补偿计人民币1万元整，共计人民币2万元。

    双方当事人均不服一审判决，向南京市中级人民法院提起上诉。

    从某某上诉称：原审判决带有倾向性和片面性，在证据的认定上缺乏公正，请求二审法院撤 销原判，支持上诉人的诉讼请求。

    鼓楼医院上诉称：原审认定事实清楚，但适用法律错误，致使我院承担了不当的民事责任， 请求二审法院维持原判第一项，撤销原判第二项。二审期间，鼓楼医院又明确表示服从原审判决。

    南京市中级人民法院确认一审查明的事实。认为：从某某所患的右乳腺颗粒（肌母）细胞瘤， 是一种极为罕见的病例，现在的病理诊断学认知水平难以对此病例作出精确认定，此前本市主要大医院的病理诊断史尚未遇过，故综合世界目前对此病例的研究发展、南京地区的诊疗水平以及快速冰冻切片检查术的局限性等因素考虑，对鼓楼医院在快速冰冻切片检查术中未 能明确本病例是颗粒细胞瘤不应过于苛求。从某某主张本病例为良性颗粒细胞瘤，鼓楼医院 的病理诊断错误，提交了有关医院的病理诊断结论予以证实。鼓楼医院认为本病例属恶性颗 粒细胞瘤，其快速冰冻切片检查诊断为恶性肿瘤是正确的，并提交了由该研究领域学术权威 张仁元教授签发的病理诊断意见和上海数家医院的病理诊断意见予以印证。双方提供的证据 均有一定的说服力。鉴于国内外权威专家论述颗粒细胞瘤属良恶性质难以准确界定的少数肿 瘤之一，目前病理界命名各异，标准不一，且双方所持的病理切片组织状况好坏程度也存在差异，故不宜认定鼓楼医院的病理切片诊断错误，为此鼓楼医院选择根治术并无不可。因从 某某所受损害与鼓楼医院的医疗行为存在因果关系，而双方当事人又均无过错，从公平原则 考虑，鼓楼医院可给予从某某一定的经济补偿。二审期间，鼓楼医院对原审判决其补偿从某某2万元亦不持异议。从某某的上诉理由不能成立， 对其请求不予支持。鼓楼医院上诉提出原审适用法律错误，应予采纳。依照《中华人民共和 国国民事诉讼法》第一百五十三条第一款第（一项），《中华人民共和国民法通则》第九十八 条、第一百三十二条的规定，该院于2001年1月13日判决如下：驳回上诉，维持原判。

    评析本件医患纠纷案的特殊性在于，当医院对一些医学上的疑难或罕见病症实施了医疗或救治行 为后效果差强人意，或在医疗过程中未能尽善尽美，此时，法院从法律角度应如何客观公正 地评价医院的医疗行为，我们有以下思考。

    首先，应将专家责任的概念引入案件审理，这样才能对医院的行为有一个正确评判的标准。 专家责任，即具有特别知识和技能的专业人员在履行专业职责的过程中给他人造成损害所应 承担的民事责任。作为承受该责任的主体应具备以下条件：（1）受过某一专门职业教育和训 练；（2）具有从事某专业活动的资格；（3）以其具有的专业知识或资格向社会或他人提供智力 性的专门服务并从中获益；（4）与其服务的对象之间存在特别的信赖关系。由此可见，本案 被告即是专家责任的适格主体。本案中医疗专家责任要求其在进行执业活动时应负有高度注 意的义务、救死扶伤的义务及努力完成工作任务的义务。这些义务有些是医疗服务合同所 约定的，有些则是职业道德、行业规范、法律的要求。其在执业过程中，违反上述义务给他 人造成了损害，则应承担专家责任。专家责任是一种过错责任，须符合侵权行为的构成要件 .但在认定专家的具体行为是否违法及主观上是否具有过错时，必须将行业习惯、惯例及现 有行业科学技术的实际发展状况作为重要的考量情节，以一个合格的专业人员所应有的专业 知识和技术水平来判断，这样才符合对专家责任进行认定的原则。结合本案的具体情况，分 析被告的行为，我们认为：其一，因原告所患肿瘤的罕见及特殊，被告在术前不能排除肿瘤 恶变的可能，故按行业习惯及惯例采用术中快速冰冻切片珍断，对此方案，被告术前进行了 慎重讨论，尽到了应尽的注意义务，且向患者亲属予以了必要告知，亦尽到了告知义务；另 被告对原告在术前进行了常规及必要的检查，术中的操作及术后护理亦按规程要求履行，无 异常现象。据此，应认定被告对原告实施的医疗行为在操作上符合规范及行业习惯。其二，因我国目前对该肿瘤研究的技术水平尚不能对该肿瘤的良恶性有较明确的判断标准，且 该肿瘤恶性表现形式复杂，故快速诊断难以达到精确程度，这也是该领域的技术发展状况所 决定的。其三，医学科学是极为复杂的学科，对同一病例，医师因学识、经验、认识差异而 可能得出不同的印象和判断，尤其对于一些罕见病例，则判断差异更为显著。综合此三点，可认定被告出具的快速切片病理报告虽没有达到精确诊断的要求，但并不能视为误诊或错诊 ，在此诊断的基础上实施根治术亦符合行业惯例。更为重要的是，术后被告又对该病例进行 了进一步的病理检测，并如实出具了详细报告，此亦体现了被告对该病例诊疗的科学态度， 尽到了其应尽的合同义务和法定义务。据此，应认为被告的行为不存在违法，其主观亦无过 错，不应承担责任。因此，虽然本案被告因术中未能精确诊断本病例为侵袭性颗粒肌母细胞 瘤 ，未能最大限度地尊重患者意愿，手术方案的选择亦不是在最精确真实的诊断前提 下进行，未能充分地考虑患者是一未婚女性而行最恰当的手术，使患者及亲属在术后得 知有关情况与术中了解的情况不完全相符合，对术后的现实有无法接收的焦虑和痛苦，并为 弄清真相而奔波，经济上亦承受了一定的负担，但此是因受限于目前医学科学对该肿瘤的诊 疗水平及技术，若要求由被告承担此局限性的后果，势必不利于医学科学的发展，从社会公 平的角度考虑亦显不妥。

    其次，对原告的损害后果应作客观认定。我们认为，对原告而言，客观上其身体受到损害， 但在目前医疗水平不能同时对患者的生命健康及身体完美并重予以保护时，医者的职责及患 者的根本利益均要求对生命健康的保护是首要的、根本的，对患者身体的保护须以不丧失生 命健康为成就条件，故原告虽然右乳缺如，但此并不能视为医疗行为的损害后果，原告此 治疗而承受的不利影响应是一种因病情诊断差异而产生的对术后现实不能接受的痛苦。

第5篇：医学细胞生物学实验报告范文

关键词：骨质疏松症；报告基因；TGF-βⅠ、Ⅱ型受体；Ⅰ型胶原

中图分类号：R285.5文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0820-03

The experimental effect of Isopsoralen on TGF-β receptors of mouse preosteoblasts

TA Na【sup】1，2【/sup】，TAN Ming-sheng【sup】1，2【/sup】，YI Ping【sup】2【/sup】，JIANG Xin【sup】2【/sup】，YANG Feng【sup】2【/sup】，TANG Xiang-Sheng【sup】2【/sup】

（1.Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China2.China-Japan Friendship Hospital，BeiJing 100029，China）

Abstract:Objective：To investigate the effect of different concentrations of isopsoralen on cell proliferation, expression of type Ⅰcollagen,and TGF-β Ⅰ, Ⅱtype receptors of mouse preosteoblasts （MC3T3-E1） as well as the relationship between primary osteoporosis.Methods：Cells were divided into normal group and different concentration of isopsoralen groups.Cells proliferation was detected by MTT methodSirius red staining was used to detect the expression of type ⅠcollagenThe activity of TGF-β1 passway was detected by luciferase reporter geneAnd Western-Blot for testing TGF-βⅠ, Ⅱtype receptors in each groups. Result：After stimulation of different concentration of isopsoralen, The cells proliferation were apparently promoted（P

Key words:osteoporosis；Report gene；TGF-βⅠ Ⅱreceptor；TypeⅠcollagen

收稿日期：2010-11-16

基金项目：首都医学发展科研基金资助项目（2002-3076）；中日友好医院院内配套资金

作者简介：塔娜（1979-），女，博士研究生，研究方向：中西医结合骨科。

通讯作者：谭明生（1958-），男,教授、主任医师,博士研究生导师，研究方向：脊柱外科。

原发性骨质疏松症（Primary Osteoporosis，POP）是一种增龄性全身骨骼退变疾病。骨质疏松病理改变主要涉及成骨细胞骨形成减少与破骨细胞骨吸收增加导致人体骨量减少和骨密度（BMD）降低。据2006年的流行病学调查，我国60岁以上老年人中骨质疏松症的发病率较40岁以上人群明显增高，女性尤为突出【sup】［1］【/sup】。妇女雌激素水平下降是导致绝经后骨质疏松症的主要原因。雌激素补充疗法是预防、治疗绝经后骨质疏松症的首选疗法【sup】［2］【/sup】。转化生长因子β（TGF-β）是一种细胞活动的多功能调节肽，据靶细胞不同发挥促进或抑制增殖的调节作用。TGF-β主要通过TGF-βⅠ、Ⅱ型丝氨酸／ 苏氨酸激酶受体复合物及细胞质内的下游信号传导分子Smads蛋白家族成员发挥生物作用。TGF-β由具有成骨作用的细胞合成和分泌，并以自分泌的形式调节这些细胞的功能【sup】［3］【/sup】。TGF-β对细胞外基质具有重要的调节作用，Ⅰ型胶原为骨基质主要成分，由成骨细胞合成分泌，是骨组织的重要成分之一，骨质疏松时成骨细胞数量减少并伴有骨胶原合成降低。补骨脂为补肾助阳类中药，是防治原发性骨质疏松症中药复方常见组份之一。异补骨脂素是从补骨脂中提取的香豆素类化合物，已有研究证明其具有雌激素样活性，但无雌激素样不良反应。目前很少有关于异补骨脂素防治骨质疏松机制方面的研究报道。为此，本文从细胞水平观察了异补骨脂素对成骨细胞增殖及骨胶原基质的影响以及对TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体的作用，旨在探讨异补骨脂素防治原发性骨质疏松症的作用机制，为异补骨脂素的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验细胞

实验细胞： MC3T3-E1、293T细胞购自协和医科大学细胞中心。

1.2 主要试剂与药品

异补骨脂素 中国生物药品检定所。DMEM培养基购自中国医学科学院细胞中心，胎牛血清购自Hyclone公司，硫酸链霉素、青霉素（Hyclone 公司）。MTT购自Sigma公司，DMSO，0.25%胰蛋白酶溶液，天狼星红染液购自Electronic Microscopy Sciences,一抗TGF-βI、TGF-βII（sc-398，sc-400）及二抗购自Santa公司，转染试剂LipofectAMINETM 2000；双荧光素酶报告基因（购自Invitrogen公司）。

2 实验方法

2.1 MTT法检测正常对照组及不同浓度异补骨脂素组MC3T3-E1细胞增殖情况

采用MTT法，以1×10【sup】4【/sup】/孔将细胞接种于96孔板中，待细胞贴壁后，应用无血清培养液培养24h，分别加入经含无水乙醇培养液配制的不同浓度异补骨脂素溶液（10【sup】2【/sup】、10【sup】1【/sup】、10【sup】0【/sup】、10【sup】-1【/sup】、10【sup】-2【/sup】、10【sup】-3【/sup】、10【sup】-4【/sup】、10【sup】-5【/sup】、10【sup】-6【/sup】μM）每组设6个复孔，并设相应正常对照组进行比较，并在培养72时，每组加入MTT至终度为0.5mg/ml；继续培养4h，去除培养液，加入200μlDMSO溶解沉着的色素染料10分钟，上酶标仪检测490nm光吸收值。

2.2 天狼星红染色测定细胞层的胶原含量

去除96孔板中的培养液，－20℃甲醇固定细胞过夜，PBS洗1遍；0.1%天狼星红室温染色1h，去除染液，用0.1%冰醋酸洗3遍，每次5min；每孔加入0.1mol/L氢氧化钠200μL，室温作用1h，振荡混匀，于540nm测光吸收值检测胶原【sup】［4］【/sup】。

2.3 细胞分组

传代细胞分传为5盘细胞（60mm dish细胞培养皿），细胞融合达60%时，吸出每瓶废液；4mL无血清 DMEM，继续置孵箱孵育，同步24h，使细胞静止于Go；每盘为一组，分为五组：正常组、不同浓度异补骨脂素组。正常组，正常培养；不同浓度异补骨脂素组，含有不同浓度异补骨脂素的培养基培养。各组细胞置37℃、5%CO【sub】2【/sub】孵育箱培养，72h后提取总蛋白。

2.4 荧光素酶报告基因

荧光素酶报告基因（12×CAGA）【sup】［5］【/sup】；按照LipofectAMINETM 2000 提供的方法分别转染293T细胞。转染24 h后，同时分别给予不同浓度的异补骨脂素刺激12h后收获细胞，在荧光酶报告分析仪（Top Count）专用的检测板（一种96 孔板）每个孔中依次加入荧光酶催化底物I，Ⅱ以及上述细胞裂解物，并混匀。利用相应软件程序进行荧光酶活性测定，统计分析，绘图。

2.5 Western bloting检测

2.5.1 细胞浆蛋白提取 小鼠胚胎前成骨细胞（MC3T3-E1）在10%小牛血清DMEM培养传代。于实验前采用无血清DMEM同步24 h,然后以终浓度分别为0、10【sup】-1【/sup】、10【sup】-2【/sup】、10【sup】-3【/sup】、10【sup】-4【/sup】μM含药培养基孵育72h,正常对照组不加异补骨脂素。于实验终点分别提取胞浆蛋白,每瓶加入200μL胞浆裂解液冰上裂解30min,用细胞刮刮下细胞移入一预冷EP管中,4℃下离心20000 r/min×5min立即将上清液移入一预冷EP管中与等体积上样缓冲液混匀后100℃煮沸10min，-20℃备用。

2.5.2 步骤 取等体积上述变性蛋白液，于SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离,其中分离胶与浓缩胶浓度分别为10%、4%。然后将胶进行电转膜,取出膜后4℃封闭过夜加入抗人TGF-β1I,Ⅱ型一抗（sc-398，sc-400）,4℃过夜。TBST洗10min×3加二抗37℃孵育1h。再次洗膜后ECL（Thermo）显色, x光胶片曝光后，图片结果进行统计分析。

2.6 统计学方法

利用ImageJ分析软件对结果进行图像分析。各组图像分析结果采用（±s）表示,所有实验数据均采用统计软件SPSS 11.0进行单因素方差分析,P

3 结 果

3.1 MTT法检测异补骨脂素对MC3T3-E1细胞增殖的影响

表1 72h异补骨脂素对成骨细胞增殖的

促进490nm紫外吸收A值（±s）

注：各加药组与同时对照组（异补骨脂素浓度为0μM）比较，P

MTT结果见表1，对照组细胞排列整齐贴壁生长；用药组细胞亦排列整齐贴壁生长。于72h,异补骨脂素从10【sup】-4【/sup】μM至10【sup】-1【/sup】μM时，能显著促进MC3T3-E1增生（P

3.2 天狼星红染色观察异补骨脂素对小鼠胚胎前成骨细胞胶原成分的影响

表2 异补骨脂素干预72h对成骨细胞层胶原合成的

促进540nm紫外吸收A值（±s）

胶原测定结果：胶原经天狼猩红染色后检测结果见表2，异补骨脂素不同程度促进MC3T3-E1细胞分泌Ⅰ型胶原，不同剂量组之间均有统计学意义（P

3.3 异补骨脂素对各组细胞TGF-β1通路活性的影响

与正常对照组相比各异补骨脂素干预组均可明显激活TGF-β1报告基因，其中以10【sup】-3【/sup】μM异补骨脂素刺激组对荧光素酶表达活性的影响最强，而10【sup】-4【/sup】μM异补骨脂素组则有所减弱。

3.4 异补骨脂素对小鼠胚胎前成骨细胞转化生长因子βⅠ、Ⅱ型受体蛋白的影响

注：1：正常组；2：异补骨脂素10【sup】-1【/sup】μM组；3：异补骨脂素10【sup】-2【/sup】μM组；4：异补骨脂素10【sup】-3【/sup】μM组5：异补骨脂素10【sup】-4【/sup】μM组。

表3 MC3T3-E1细胞72h胞浆蛋白

TβRI、TβRⅡ图像分析结果（±s）

TβRI 与 TβRII的Western bloting实验结果进行图像分析显示：与正常组相比异补骨脂素作用于MC3T3-E1细胞72 h可明显促进TβRI 与 TβRII表达（P

4 讨 论

成骨细胞数量减少和合成细胞基质成分的功能降低是骨质疏松的主要病理改变之一，可受雌激素缺乏和细胞因子调节改变等多种因素的影响。成骨细胞功能和数量的改变，造成骨形成最佳条件缺陷，必将导致骨组织结构及力学特征的改变【sup】［6］【/sup】，从而导致多种骨质疏松性骨折。此外，在复杂的骨代谢调控网络中，已有研究证实细胞因子TGF-β及其信号通路在骨重建中发挥重要作用【sup】［7］【/sup】。Thirunavukkarasu K等【sup】［8］【/sup】在实验研究中证明TGF-β可通过促进骨保护素（OPG）基因表达而抑制骨吸收并可促进成骨细胞增殖和分泌细胞外基质而有抗骨质疏松作用。G.E.Krassas等【sup】［9］【/sup】的研究表明在体内雌激素可明显刺激骨中TGF-β基因转录与合成，对骨重建有着重要的作用。雌激素缺乏是绝经后骨质疏松症主要病因，雌激素替代疗法（HRT）是治疗该类骨质疏松症的主要方法之一。但由于雌激素的诸多不良反应，近年来人们已逐渐将目光转向应用中医药防治骨质疏松。

异补骨脂素是中药补骨脂中提取的香豆素类化合物,具有雌激素样活性,但无雌激素样不良反应【sup】［10］【/sup】。近年来关于植物雌激素类药物对成骨细胞及细胞外基质和TGF-β信号通路方面的研究鲜见报道，这方面的研究可为合理采用中医药防治骨质疏松提供理论基础。原发性骨质疏松症涉及细胞信号通路以及成骨细胞和细胞外基质（ECM）成分的变化。骨组织中TGF-β可由成骨细胞分泌，TGF-β参与组织修复与其他病理生理过程，是一种组织内存在广泛的信号传导路径。其中TGF-β1为具有多种生物学功能的活性肽，在骨质疏松症发病过程中的作用越来越受到关注。

我们的试验发现，异补骨脂素可明显促进体外培养小鼠胚胎前成骨细胞增殖、Ⅰ型骨胶原的分泌以及刺激TGF-β1活性并有TGF-βⅠ、Ⅱ型受体蛋白表达增加，推测植物雌激素异补骨脂素可通过TGF-β信号通路来促进成骨细胞增殖及胶原基质的合成，从而发挥抗骨质疏松作用。但是对其作用机制仍需要进行深入研究，从而为临床更好地采用中医药防治绝经后骨质疏松症提供理论支持。

参考文献

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［5］ Dennler S, Itoh S, Vivien D. Direct binding of Smad3 and Smad4 to critical TGFβ inducible elements in the promoter of human plasminogen activator inhibitor-type 1 gene［J］. EMBO,1998,17:3091-3100.

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第6篇：医学细胞生物学实验报告范文

格登生于1933年，15岁时就读于英国贵族学校伊顿公学。格登从小就对生物学情有独钟。但是，他的生物课成绩在250个男学生里面排名倒数第一，其他理科成绩也垫底，被同学讥笑为“科学蠢材”。

在1949年的学校成绩报告单中，格登被男教师加德姆评价为：“我相信格登有成为科学家的志向，但以他现在的表现来看，这真是万分荒谬可笑”。这位男教师还称，格登“无法明白最简单的生物学事实”，继续教他“简直是浪费彼此的时间”。

对于这份差生评价报告，格登多年以后仍记忆犹新。“老师对我的评语大概是说，我是他见过的生物课学得最差的学生。”2006年，格登在接受媒体采访时如此自嘲。

当格登从伊顿公学毕业，申请牛津大学时，由于成绩不佳，他被古典文学研究系录取。“招生主任找到我，对我说，牛津可以录取你，不过有两个条件：第一，你必须马上来上学；第二，你不要学习入学考试的科目。”格登说。

这时进入牛津大学的格登，仍然对生物学情有独钟，他后来转入动物学系，正式开始科研生涯。格登曾称，尽管成绩不好，但他自小便被生物学深深吸引。兴趣，而不是成绩的指引，最终让格登在生物学领域“化茧成蝶”。

1958年，在完成博士学位时，格登从蝌蚪细胞提取出完整细胞核，成功克隆了一只青蛙，这次成功随后被应用于哺乳动物的克隆。格登在这次实验中用于细胞核移植的工具和技术至今仍在使用，他也因此被称为“克隆领域的教父”。

1962年，格登在英国《胚胎学与实验形态学杂志》，论述了一个突破性理论：细胞的特化机能可以逆转。这项发现震惊生物界，也遭到很多质疑。当时全球生物学界普遍认为，特化细胞发育过程是不可逆的。直到2006年，日本教授山中伸弥通过对小白鼠的实验，证明了一个成熟特化细胞的细胞核可以被逆转到非成熟的干细胞状态，格登之前的发现才逐渐被学界接受。

在牛津读完博士后，格登又在加州理工学院完成博士后研究。从1971年开始，格登一直在剑桥大学工作。如今，79岁的他现在仍坚持全职工作。

在被通知获得诺贝尔奖时，格登还在实验室做研究。一名英国记者曾试图采访格登，但他的实验室工作人员答复：“格登正在工作，请不要打扰他。”

在格登剑桥大学的办公室里，至今仍挂着60多年前的那份“差生报告”。“当遇到麻烦，比如实验不成功，我就看看这个报告，提醒自己也许不擅长这个工作。但我要努力，否则真的被老师说中了。”格登说。

从被同学讥笑为从“科学蠢材”到今天的医学诺奖；从老师断言不可能成为科学家到今天的大科学家，英国医学教授约翰·格登的人生经历给人启迪。

做人当有志气。格登回忆说：“每当遇到什么麻烦，比如实验无法进行下去等情况时，我都会看看这份评价，来提醒自己要努力坚持。”这就是做人的志气，别人说我不行，我偏偏要行起来，别人说我不能，我偏偏要能起来，做人有了这种志气，什么事都能成。

人生当有坚守。虽然成绩差、不被老师和学校看好，但格登仍然非常坚持自己的想法，他对生物学的热爱程度从来没有减少过。据悉，格登少年时就被生物学深深吸引，他甚至在学校养过上千只毛毛虫，并看着它们变成飞蛾，这在当时还引起老师的强烈反感。人生当有坚守，坚守自己的兴趣，坚守自己的爱好，只要你的坚守是对的，是坚持的，就必然受到命运的呵护，上帝的关爱，事业的幸运，坚守早晚会成就一番大事业。

父母应该尊重孩子的选择。格登的父亲曾希望他去参军或进入银行工作，因为格登身体很棒且是壁球高手。但格登的家庭医生却认为他不适合在军队发展，因此将他的小感冒诊断为支气管炎，由此中断了他的参军之路。格登回忆说，幸亏当时没去参军，不然就没有现在热爱的职业生涯了。这对我们中国做父母的是一个提醒，千万不要让孩子按照自己的设计去成长，应该让孩子根据自己的个好去成长，兴趣是最好的人生成功要素。

第7篇：医学细胞生物学实验报告范文

革兰染色法是丹麦细菌学家christian gram在1884年创建的细菌鉴别染色法(differential staining),是鉴定细菌最基本的方法 标本直接或沉渣涂片革兰染色(简称涂片染色,下同)是临床微生物检验的日常检查方法,也是卫生部《全国检验操作规程》所规定的必检内容 革兰染色,一百多年来沿用至今,仍具有重要的使用价值 本文重点阐述涂片染色在临床微生物检验工作中的具体作用,表现在以下几个方面

有助于正确鉴别标本来源和性质,排除污染,确定感染

正确留取标本,对报告结果至关重要 如下呼吸道感染患者送检的标本是来源于呼吸道还是口腔 除肉眼观察外,更可靠的方法是涂片染色镜检 呼吸道标本以脓细胞 黏液丝 柱状上皮细胞为主;口腔唾液以鳞状上皮细胞为主 涂片染色可直接反映标本留取是否合格

涂片染色镜检是鉴别炎性标本与非炎性标本的可靠方法,脓细胞的数量直接反映感染存在的可能性及感染的程度;另一方面,涂片染色与培养结果符合与否,可以帮我们排除污染,确定感染

有助于判断机体某些系统微生态是否平衡

由于细菌培养受培养基 环境因素 培养条件以及细菌本身生长速度等多种客观因素的影响,培养生长的微生物种类及数量不一定能客观反映某些系统为生态情况;而标本涂片革兰染色不受这些因素的影响,能够真实客观地反映微生物包括某些厌氧菌的生态平衡情况 涂片染色对上呼吸道 口腔 下肠道 泌尿生殖道等有菌部位标本尤其重要

有助于对感染菌的判断

正常情况下,人体与常居菌形成一种稳定的微生态平衡 由于某些原因,一旦机体的这种微生态平衡遭到破坏,某种非优势菌取得优势的时候即可引起机体的免疫反应,进而可引起感染 脓细胞参与对感染菌的吞噬作用 因此,脓细胞所大量吞噬的细菌即是引起感染的病原菌

有助于提高标本阳性检出率

标本涂片染色镜检见较多脓细胞,而找不到病原菌时,就要考虑结核杆菌 军团菌 病毒等感染的可能,并进一步有针对地做相应的特殊培养 如果标本涂片中脓细胞伴随细菌出现,而普通培养没有相应细菌生长,应考虑厌氧 某些需氧菌 生长缓慢的细菌,对所用抗生素敏感细菌的感染以及培养失控的可能性,进一步作厌氧培养或其他特殊培养 由于各种先进技术在微生物领域的应用,新病原菌不断发现,且都需要特殊培养才能生长,有的甚至不能体外培养 因此,为了尽可能减少漏检,标本涂片革兰染色具有特别重要的价值

有利于临床早诊断 早治疗

第8篇：医学细胞生物学实验报告范文

干细胞移植，目前尚处临床阶段。然而，国内有多家医院打着干细胞移植的“幌子”，向患者收取高额费用，而一些疑难杂症患者，对此也趋之若鹜。近日，记者对干细胞滥用现状，展开了调查……

国家目前尚未放开

记者以糖尿病患者的名义，致电天津某知名军医院细胞治疗中心，咨询干细胞移植的治疗方法。接听电话的是一名女士，她说，经过检查，如果没有肿瘤等其他问题，就可接受自体干细胞抽取和培养。通常从大腿根部抽取，经过2～3周的细胞培养，就可进行回输治疗。

在该细胞治疗中心的网站上，记者看到，干细胞治疗几乎可以治疗所有疾病，尤其是一些疑难杂症，包括一些很难根治的皮肤病，像牛皮癣一类的。

随后，记者以真实身份，找到该治疗中心的负责人潘女士。她告诉记者，医院的干细胞治疗很正规，干细胞主要取自自体周血干细胞或者骨髓。针对每种疾病，干细胞植入的方法也不同，糖尿病是直接回输，帕金森就得是内部植入了。

“干细胞移植，国家目前也没有相关的评价标准，但我们肯定是正规的，而且有中科院院士带领的科研团队。”潘女士说。不过，她也向记者道出了真相：“其实国家对干细胞治疗还没有放开，仍还在研究阶段。

现已形成完整产业链

据潘女士透露，干细胞治疗的时间为一周，如果在本地，通过门诊就可治疗，治疗费用需要两万多元。至于治疗效果，以糖尿病为例，若无需打胰岛素，病程只有两三年的患者，通过手术可彻底治好；但若需打胰岛素，病程比较长如十年左右的患者，效果就会慢或者差，恢复时间也很长。

“高昂的费用背后便是高昂的利润。”有业内人士在采访中说道，截止到目前，在中国，所谓的干细胞治疗，已经从细胞的来源、制备到对病人的营销、治疗，都已形成了一个完整的产业链。而在这其中，每一个环节都是盈利的，特别是利用脐带血干细胞来进行治疗，其利润就更是可观。

该人士指出，从患者身上采集脐带血，在医院里面一般价格大概在300元左右。但是，经过体外一系列的培养过程，到用到病人身上，可能是4万甚至8万，这中间确实是要消耗一些费用，如人工成本等，但相对来说还是很低。也就是说，这个中间的利润，是相当可观的。

手术存在多处混乱

“目前国内有认知性的误区，”清华大学医学院干细胞与再生医学中心教授郭伟告诉《北京科技报》，“科学上所提出的胚胎干细胞，是特指胚胎早期从囊胚内细胞团里取出的干细胞。但是在国内所指的胚胎干细胞，则是指从胚胎中提取的组织干细胞。

“当然，一些干细胞移植病例治疗效果非常显著。”郭伟说，有瘫痪病人在打入干细胞后，手都能够自主活动。“但这些干细胞的性质，没有经过科学鉴定，也就是说，这一批干细胞可能对这个病人产生作用，但是下一批可能就不会如此幸运了。”

由于缺乏科学的鉴定，对于干细胞产生的疗效，郭伟表示需进行进一步的科学研究，“究竟是打入体内的干细胞起到了作用，还是外源干细胞分泌的某些物质，诱导了体内的一些物质或细胞产生了治疗效果，目前还需要进一步鉴定。”

“干细胞治疗的主要问题，在于身体对干细胞的排异反应。而除了这些可知的问题，还有很多我们并不清楚的问题。”中国科学院院士翟中和说，目前，干细胞研究还处在动物实验的阶段。虽然有医院在临床治疗上使用，但是效果并不明显。“干细胞研究有前途，但并不代表一定会有很好的应用结果。”

术后缺乏跟踪和鉴定

在国外，对干细胞手术极其严谨。以胚胎干细胞为例，国外的医学者发现将胚胎干细胞直接打入体内，就有可能引起畸胎瘤，而畸胎瘤就是一种癌症，所以胚胎干细胞只有在体外分化成为特定的组织干细胞或者成熟细胞，并除去胚胎干细胞后，才能用于临床治疗。

郭伟告诉记者，美国在进行干细胞移植时，此前要在实验室验证干细胞的效果和毒性，然后进入动物实验，在进入人体试验后，必须经过美国FDA的批准，才能开始临床1期的安全性测试和毒理性测试，临床2期初期疗效测试，3期大规模测试，在足够有效以及安全的前提下，才能进行临床使用。“这个时间大概还需10年。”

然而，郭伟发现，“中国有医院已实际进行了干细胞移植手术，有的医院甚至在推广干细胞治疗。”令他感到遗憾的是，在进行手术后，几乎没有严谨的术后长期跟踪和鉴定，也没有针对干细胞本身的特性进行科学的论证。

第9篇：医学细胞生物学实验报告范文

[关键词]直肠癌药敏性检测 化疗药物检测

[Abstract][Objective]This is an empirical study which examines the chemosensitivity in clinical chemotherapy area, aiming at providing empirical analysis regarding clinical chemotherapy for rectum cancer. [Method]With the MTT method, 76 patients who suffered carcinoma of rectum were introduced into the empirical study. All the data and results was carefully recorded, in doing so the chemosensitivity analysis in clinical chemotherapy. [Result]According to the examination, 46 cases of carcinoma of rectum shows the different chemosenstivity with the order following: adriblastine, hydroxyeamptotheeine,5-Huorouraeil,cisplatin,mitomycin, which shows different results compared with the previous studies. Again, drug combination for carcinoma of rectum treatment shows an advantage effect compared with that of single medicine treatment. [Concision]The assay results provides the effects of different drug combination, in doing so a important indicator as well as the guidance for future carcinoma of rectum chemotherapy.

[Key words]Carcinoma of rectum; chemotherapy; chemosensitivity assay;

手术切除是目前治疗结肠癌的主要手段,但是作为最为常见的恶性肿瘤之一,直肠癌及易出现复发和转移。因此,医生大多根据经验使用化疗方案作为治疗结肠癌的重要手段。但是,由于肿瘤具备异质性的特点,传统的单药或者联合化疗方法很难满足不同患者的个体需求。为了研究直肠癌细胞对不同化疗药物的敏感性差异,提高术后化疗治疗效果,我们使用MTT方法对76例直肠癌细胞标本对不同单药和联合化疗药物的敏感性进行观察研究,并对试验结果进行统计分析,为以后的直肠癌临床尤其是不同个体的治疗方案提供实践依据,现将结果报告如下:

1 资料和方法

1.1 资料

本组病例来源于1/2009-12/2009本院的直肠患者,(手术前,手术均未使用化疗),其中男46例,女30例。平均年龄62岁。我们分析的病例学的类型如下:分化型腺癌31例,管状腺癌30例,腺鳞癌7例,小细胞癌5例,黏液性腺癌3例。

1.2 试验仪器设备

(1)CO2 细胞培养箱(shedon company); (2)倒置荧光相差显微镜(Olympus);(3)自动酶标仪(美国318-Microplate Reader 公司); (4)超净工作台(上海精密仪器厂); (5)恒温水浴箱(江苏太仓HWS-20);(6)微量振荡器(苏州安泰仪器厂); (7)低速离心机(北京医用离心机厂LDZ5-2);(8)96孔细胞培养板. 实验药物及试剂:(1)10 %小牛血清(杭州四季青); (2)MTT(美国FLUKA公司); (3)二甲亚砜(DMSO); (4)RPMI-1640(GIBCO); (5)抗癌药物:5-氟脲嘧啶(5-FLuorouracil,上海旭东海普药业)丝裂酶素(MMC)羟基喜树碱(HCPT)阿霉素(ADM)顺铂(CDDP).

1.3 试验方法

制备肿瘤但细胞悬液:在手术切除直肠后,我们在白直肠癌肿瘤生长旺盛的边缘处切除大约1.3cm的肿瘤组织,放入含有青霉素和链霉素的双抗液中。用常规的方法修剪除去肿瘤周围坏死组织及非肿瘤组织,剪碎肿瘤组织,并且用不锈钢滤网300目制作成肿瘤但细胞悬液,将其离心后弃上清液(1000rpm/m, 10min, 下同),用小牛血清液100ml/l调整细胞浓度为4*10(4)-5*10(5),以每孔200ul的体积,在培养板上以96孔种植。

在96孔培养板上,在第一列的平行的8个孔加入10%小牛血清液200ul进行实验试剂对照,试剂对实验的影响在在判断结果时排出;在第二列的平行的8个空中,加入200ul未加抗癌药物的肿瘤但细胞悬液,进行肿瘤细胞阴性对照,各种抗癌药物实验组,每中药物有3个平行孔,没孔加药量为20ul,终浓度为各抗癌药物浓度的0.1。在37摄氏度,100ml/二氧化碳及饱和湿度的细胞培养箱中放置培养板,培养68h,其后,取出离心,然后弃上清液,每孔加入不完全培养液200ul,5mg/ml,继续培养4h,取出,再离心上清液,每空加入DMSO 200UL,用微量振荡器振荡5MIN,在578nm波长自动梅标仪上进行读数和比色,测出每孔吸光度值。

药物对肿瘤细胞的抑制率是对其判断的重要标准2。细胞抑制率大于70%,我们称其为敏感,在50%-70%之间,我们称其为中度敏感,小于50%我们称其为不敏感。其中敏感率百分比为阳性病例于改组病例相除的百分率。

在进行瘤体手术切除后1年到1年半无复发征状的瘤体患者,我们将其视为临床用药有效。手术没有进行瘤体切除的患者,我们按照WHO统一标准进行评价3。其中CR(完全缓解)+PR(部分缓解)为有效。

1.4统计学处理

我们根据对每组药业的复孔D值进行测定,计算药物对癌细胞标本的平均抑制率(IR),以抑制率大于50%为敏感性,介于30%至50%定为中敏感,小于30%为不敏感4。并且采用国际通用的SAS统计软件对实验组进行方差分析和χ2检验。

2.结果

试验结果见表1,标本癌细胞对单药的敏感性顺序如下:ADM > HCPT > MMC > CDDP >5-FU . 其中,癌细胞对奥沙利铂最敏感,χ2 =39.23 P =0.003,因此实验组内个体有显著差异性。同时,癌细胞对联合用药的敏感性较单药高,其中以5-FU+CDDP最高,而敏感性最低的是CDDP+MMC,仅为(21.09±3.13)%, 单用MMC和联合HCPT药物比较,χ2=7.13,p=0.023,实验组内个体有显著性差异。

3.讨论

MTT方法可以快速检测癌细胞对各种单药及联合药物的敏感性,且对临床治疗有很好的指导性。在试验中,我们在对39例结肠癌病患制定联合药物方案中,参考MTT方法得出的药敏性报告占37例,比例为94.08%。在选取方案过程中,医生需要对于病人的个体情况,如肿瘤大小,药物的毒副作用等综合考虑,制定化疗方案。

我们通过肿瘤细胞体外培养的药敏试验,对临床经常使用的五种单药和组合用药的敏感性进行研究和统计分析,发现各单药和联合用药组间都具有显著的统计性意义(P

本试验的研究结果说明直肠癌细胞对于不同个体对于药物的敏感性差异是显著的,因此医生根据传统的经验制定化疗方案是盲目的8。因此,医生根据药敏试验结果,选择敏感性较好的化疗药物制定联合用药方案不失为一种较为有效的治疗手段,这种方法也被越来越多的运用于直肠癌的临床治疗过程之中。同时药敏试验对直肠癌的治疗效果需要长期的跟踪观察,以明确癌细胞体外敏感性检测结果与实际治疗效果之间的相关性。

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